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上海慧穎生物科技有限公司

胎牛血清的相關問題

時間:2014-10-10閱讀:1314

 胎牛血清的相關問題

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近在培養細胞中使用胎牛血清,由于發現有沉淀,不知是否變質,在查閱相關文獻也沒有得到確切的答案.因此不敢再用原來的血清,導致浪費.在這提醒大家做細胞培養時,要注意血清的分裝.
血清是細胞培養中zui重要的元素之一。在實驗室操作中要注意及處理方法:
1. 血清保存: 建議血清應保存在-5至-2O。然而,若存放于4時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
2. 解凍血清的方法: 建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。
3. 血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?
血清中沉淀物的出現有許多種原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4. 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
5. 有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節省您寶貴的時間,更確保血清的質量!
6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀?
胎牛血清沒有預老化,儲存在2-8時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20儲存胎牛血清,避免反復凍融。
7. 如何避免沉淀物的產生?
解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20至4至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20至37),實驗顯示非常容易產生沉淀物。
解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。
請勿將血清置于37太久。若在37放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
若必須做血清的熱滅活,請遵守56,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

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