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能避免污染細胞的簡單培養方法

時間:2014-2-21閱讀:1700

能避免污染細胞的簡單培養方法

具體配液方法:

*步,配制1L培養液。培養基中含有酚紅指示劑,偏堿時液體為深紅或紫色,偏酸時則呈黃色。取配1L培養液的粉劑培養基,加入750ml三蒸水或去離子水,搖勻(一般培養液呈橘紅色);再加入碳酸氫鈉1~1.1g,至*溶解(呈深紅色);zui后再加三蒸水或去離子水至1L止。

第二步,插吸管于配好的培養液內,通入二氧化碳氣體。隨著二氧化碳氣的融人,液體逐漸變成黃色。用一次性0.22 m孔徑的濾膜于正壓情況下將該液體過濾除菌。在此過程中,由于部分二氧化碳氣體溢出,液體漸成橘黃色。此時迅速將其分裝到4個250ml的瓶內,一定塞嚴或擰緊瓶。在無菌情況下取樣本數毫升,37。c無菌培養72h,確定該批培養液無污染后方可使用。常使用的培養液存放于4℃冰箱內,其它暫時不用的可放入一20。c冰箱內保存。

第三步,根據不同細胞系的需求添加不同量血清和抗生素。將配好的培養液吸入小培養瓶內,再將適量細胞吸入,塞嚴或擰緊瓶蓋,置37。c普通隔水式恒溫箱內即可。操作過程中因有少量二氧化碳氣體溢出,液體呈橘紅色,酸堿度(pH) 約為7.0~7.2。如果細胞較少或者生長較慢。液體的pH值似宜偏酸些為好。

 

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