成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

上?;鄯f生物科技有限公司

elisa細胞裂解液獲取方法

時間:2013-12-11閱讀:5162

 elisa細胞裂解液獲取方法

細胞裂解是改變細胞通透性和活性的重要實驗方法。通常我們都會想到用RIPA裂解液提取的蛋白做elisa,但是這個方法不太推薦,從提取蛋白自身的角度來考慮,RIPA裂解液可以使蛋白質的空間結構破壞,即破壞蛋白質分子的二級和三級結構,從而使抗原決定簇得以充分暴露在外,更有利于被檢測出來;而從試劑盒本身的角度來考慮,以雙抗體夾心法為例,提取的蛋白中含有RIPA裂解液,當加入到包被的孔板當中時,可能同樣會對孔板中的包被的抗體起到了裂解作用(如SDS),從而使其失去該有的特異性,這方面可能需要考慮在內的。

下面我們推薦另外2種比較好的獲取細胞裂解液中蛋白的方法:

1、         凍溶法,是一種常用的機械裂解方式比,通常由冷凍和解凍兩部分組成(freezing and thawing),。原理:由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結構破碎。冷凍通常在液氮或-20°C冰上進行,解凍可以在37、50、65 100℃水浴中進熱休克比化學裂解溫和,但是很有效,有資料表明用熱休克和溶菌酶與SDS的方法獲得了90%的細胞裂解率。如果需求的蛋白表達很低,我們可以用細胞裂解液作輔助,方法是先用裂解液室溫裂解一小時,然后反復凍溶三次。一般可以裂解到8ug/ul切記裂解細胞時不要加太多裂解液,而且避免過多的反復凍溶。

2、         超聲波處理(Ultrasonication)既利用超聲加熱的方法,把細胞破碎。但這種處理會導致DNA 的斷裂,所以加熱不宜過劇烈,要設定好超聲時間和間隙時間,一般超聲時間不超過5秒,間隙時間大于超聲時間,這些都有利于保護酶的活性。bead-beating 也是常用的機械處理方式,有報道指出bead-beating 比熱休克和化學裂解的細胞裂解效果更好 雖然DNA產量較高,但通常得到的dna片段較小。

3、         Western Blot方法,方法步驟主要以下:

1)一瓶細胞(100ml的瓶子,PBS2次,胰酶消化,加入10ml 培養液,制備成細胞懸液;

2)細胞懸液移入10ml離心管中,4。C2500rpm,離心5min

3)上清,加入預冷的PBS(4C存放的PBS)于離心管中,吹打,4C,2500rpm,離心5min;棄上清,重復上述步驟一次;共洗細胞2次,充分洗掉培養液;

4)上清,加入200ul細胞裂解液1ml裂解液中加入10ulPMSF),置于冰上,裂解40min1h;裂解過程中可用槍頭吹打或間斷搖動離心管,以使蛋白充分裂解;

5)出離心管,于4。C,12000rpm,離心5min

6)上清移入EP管中,-20C保存,即可。

細胞裂解機制被廣泛應用于各類的生物實驗中。為達到*的實驗結果,需要注意的是所有的實驗步驟都需在四度以下進行,并且避免過多的反復凍融。而且整個實驗過程中記得戴手套。

綜述來源:慧穎生物免疫實驗室

:王

以上所述僅供參考,希望大家指教。

會員登錄

X

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~

以上信息由企業自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責,化工儀器網對此不承擔任何保證責任。

溫馨提示:為規避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。

撥打電話
在線留言
主站蜘蛛池模板: 国产精品毛片无码| 无码丰满人妻熟妇区| 日本欧美国产三级| 亚洲av无码在线播放| 91麻豆精品国产| 男人天堂最新网站| 国产最新乱伦无码视频| 乱肉合集乱1000篇小说免费下载| 很黄又污又色情又爽又猛| 神马影院视频在线夫妻视频播放| 欧美一区二区三区有限公司| 97色伦97色伦国产| 成人毛片国产a| 亚洲AV综合色情区一区| 精品国产人成亚洲区| 91精品国产免费入口| 涩里番app黄版网站| 99精品日韩欧美在线观看| 91久久国产口精品久久久久| 无遮挡18禁羞羞视频免费动漫| 日韩欧美国产在线视频| 国产三级日本三级| 久久亚洲精品高潮综合色A片小说| 神马我不卡| 亚洲av永久久久久久久| 久久久擼擼擼麻豆| 哪个网站可以看av| 日韩欧美亚洲一区精选| 成人无码WWW在线看免费| 影音先锋资源 av看片站| 精品日韩国产伦一区二区三区| 欧美一区二区亚洲va久久| 国产乱理伦片在线观看网站| 日韩中文字幕精品在线| 欧美亚洲熟女中文字幕| 少妇无码吹潮久久精品AV网站| 高清国产激情视频在线观看| 国产极品粉嫩福利姬萌白酱| 国产露脸150部国语对白| 日欧一片内射VA在线影院| 久久伊人精品中文字幕有软件|