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上?;鄯f生物科技有限公司

人甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒說明書(定量)

時間:2012-6-14閱讀:2949

產(chǎn)品名稱:甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒

方法:ELISA定量

規(guī)格:96T

產(chǎn)地:美國* 若想知道品牌請致電: !

、試劑盒的組成

1.兔抗AFP包被的微孔板:96孔,1塊;

2.零緩沖液:1瓶,13mL;

3.凍干參照標準品:1套(0,20,50,150,500和1000ng/mL);

4.酶聯(lián)試劑:13 mL;

5.TMB試劑(一步):1lmL;

6.終止液(1N HGL):1lmL。

、自備材料

1.精密吸管:0.02,0.05,0.10,0.15,0.20和1.0mL;

2.一次性吸管吸頭;

3.蒸餾水;

4.渦旋混合器或等同物;

5.吸水紙或紙巾;

6.坐標紙;

7.酶標儀。

、樣品的采集和制備

    按規(guī)定的醫(yī)學技術(shù)要求從獲得的全血樣品中制備血清,此試劑盒僅使用血清樣品,且無任何添加劑。

、試劑盒的保存和儀器

未啟封的試劑盒須保存在2~8℃的環(huán)境下;微孔板存放在有干燥劑的密封袋里,以盡量減少其在潮濕空氣中的暴露;已啟封的試劑盒在上述保存條件下,在有效期內(nèi)可保持穩(wěn)定。用酶標儀在450nm處測定吸收值時,要求譜寬≤10nm,光密度值O.D.在0~2間或更大些。

、試劑準備

1.檢測前使所有試劑達到室溫(18~25℃,下同)。

2.用0.5mL蒸餾水溶解每個凍干的標準(至少需20分鐘)并輕輕混合。已溶解的標準品須在2~8℃下密封保存。

、檢測步驟

1.把所需數(shù)量的微孔固定在支架上。

2.分別吸取10µL標準品、樣品和稀釋對照品加入相應微孔。

3.將100µL零緩沖液分別加入到每個微孔中。

4.充分混合30秒鐘(此步充分混合至關(guān)重要)。

5.室溫溫育30分鐘。

6.翻轉(zhuǎn)微孔架,棄掉溫育混合物。

7.用蒸餾水或去離子水沖洗微孔5次。

8.在吸水紙或紙巾上扣擊微孔板以*除去微孔中殘余的水滴。

9.向每個微孔中分別加入100µL的酶聯(lián)試劑,輕輕混合5秒鐘。

10.室溫溫育30分鐘。

11.翻轉(zhuǎn)微孔架,棄掉溫育混合物。

12.用蒸餾水沖洗微孔5次(請勿使用自來水)。

13.在吸水紙上扣擊微孔板以除去殘余的水滴。

14.向每個微孔中分別加入100µL的TMB試劑,輕輕混合5秒鐘。

15.室溫溫育20分鐘。

16.向每個微孔加入100µL終止液(1N HCL)終止反應。

17.輕輕混合30秒鐘(此步對確保藍色*變成黃色至關(guān)重要)。

18.在15分鐘內(nèi)用酶標儀在450m處讀出光密度值。 

   

、結(jié)果計算

1.計算出每個參照標準品、樣品、對照品和患者樣品的平均吸收值(A450)。

2.以每個參照標準品的平均吸收值作縱軸(Y),濃度值(ng/mL)作橫軸(X)在坐標紙上繪制出標準曲線。

3.根據(jù)每個樣品的平均吸收值,在標準曲線上找出相應的AFP濃度值(ng/mL)。

、標準曲線實例

    在450nm處以Y軸上顯示的吸收值,X軸上顯示的AFP濃度值得出典型的標準曲線。此標準曲線僅用于說明,不能用于計算未知樣品。每個使用者應根據(jù)自己的數(shù)據(jù)制作標準曲線。 

AFP(ng/mL)

Absorbance(450nm)

0

0.059

20

0.256

50

0.544

150

1.238

500

2.389

1000

2.906

、期望值和靈敏度

 在高?;颊哐逯校帽驹噭┖兴鶞y得的AFP值在100~350ng/mL之間可診斷為肝細胞癌。其AFP水平超過350ng/mg,通常表明已患病。大約97%的健康受試者AFP水平低于8.5ng/mL。本試劑盒可檢測的AFP的zui小濃度為2.0ng/mL。

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