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上海慧穎生物科技有限公司

人小細胞肺癌細胞NCI-H196操作方法

時間:2024-6-19閱讀:661

人小細胞肺癌細胞NCI-H196操作法
1×10?cells/T25培養瓶
培養條件:RPMI1640培養基;10%胎牛血清;1%雙抗

常溫細胞收貨當天處理方式

1.收到常溫細胞后,及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現象。

2. 鏡下觀察有無微生物污染現象,拍照記錄不同倍數鏡下細胞狀態和有無染菌現象, 方便后續售后處理。

3. 消毒后,更換贈送的培養液放置培養箱靜止2-3小時。如細胞有多數懸浮細胞需要離心收集重新接種止培養瓶。

4. 觀察細胞密度若超過 80%則可正常傳代處理(有的原代細胞不可傳代,請根據實際情況決定)傳代推薦比例 12 13(按實際收貨細胞密度決定,若不確定 可聯系技術支持);若細胞密度不到 80%則可繼續培養,注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋;懸浮細胞注意離心所有培養基以收集細胞。

5. 由于氣溫,運輸等影響造成貼壁細胞漂浮的,請將細胞離心收集后在離心管中消化后進行傳代(參考附件),或及時聯系技術支持進行指導傳代。

貼壁細胞傳代:1.從培養容器中吸出用過的細胞培養基并丟棄;

2.從與貼壁細胞層相對的容器一側輕輕加入沖洗液以避免攪動細胞層,前后搖晃容器數次

3. 從培養容器中吸出沖洗液并丟棄,向培養瓶中加入預熱的胰酶;胰酶量應足以覆蓋細胞層(T251ml)

4.將培養容器在室溫下孵育約 2分鐘(請注意實際孵育時間根據所用細胞系不同而有所差異);

5.在顯微鏡下觀察細胞解離情況;如果解離程度未達 90%,可將孵育時間延長幾分鐘,每 30 鐘檢查一次解離情況;

6.細胞解離程度大于等于 90%時,傾斜培養容器,使細胞上液體盡快流盡;加入所用解離劑兩倍體積的預熱生長培養基;吹打細胞層表面數次,使培養基分散;

7.將細胞轉移到15mL 無菌離心管中,以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘(請注意離心速度和時間依細胞種類不同而有所差異);

8.用最少體積的預熱生長培養基重新懸浮細胞沉淀,將細胞懸液按照推薦比例稀釋,并將適量體積的細胞懸液轉移到新的細胞培養容器中,把細胞放回培養箱(注:如果使用培養瓶,將其放入培養箱前應將瓶蓋旋松,以便進行充分的氣體交換,除非您使用的是通氣式培養瓶和透氣性瓶蓋)。

懸浮細胞傳代:將 T25 培養瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm 離心 5min,收集上清,加 1-2ml 培養基重懸,按 1:2 比例進行比例傳代分到新T25瓶中,補充5-8ml/瓶新的培養基 ,最后放入細胞培養箱中培養。

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