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技術(shù)點(diǎn)心：減少超濾濃縮發(fā)生蛋白沉淀
蛋白相較于核酸，因其承擔(dān)生物學(xué)功能，有“活性”特征，蛋白樣品的處理要求操作者有更好的經(jīng)驗(yàn)和技巧。拿蛋白濃縮這一常規(guī)操作來(lái)講，根據(jù)樣品規(guī)模（體積）、通量（樣品個(gè)數(shù)）、混合物的復(fù)雜程度及相關(guān)設(shè)備配套要求，就分為鹽析、透析、凍干、分子篩色譜等等不同選擇。而超濾，不論從操作的簡(jiǎn)便性還是處理效率來(lái)說(shuō)，都算優(yōu)勢(shì)突出，成為蛋白濃縮/除鹽/緩沖液置換等蛋白綜合處理的。掌握好超濾技巧，我們就能更好地保全蛋白活性和得率。針對(duì)于蛋白在超濾濃縮過(guò)程中容易發(fā)生沉淀這個(gè)現(xiàn)象，就超濾管的使用提出一些建議，供您靈活選用。
蛋白如果濃縮過(guò)快或者過(guò)度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。我們建議蛋白濃縮后的zui終濃度不超過(guò)20mg/ml。對(duì)于對(duì)濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白，我們建議的改進(jìn)方法是：
1）離心力降為推薦離心力的30%-50%；
2）改選擇截留分子量更大的過(guò)濾裝置（如原本選用10k，此時(shí)可以選擇30k）；
3）在濃縮過(guò)程中取出超濾管，用槍頭反復(fù)吹吸幾次。