問：我的色譜柱大概只進了100次左右樣品。然后，峰型開始變差，理論塔板數也變得很低。這是什么原因呢？

答：100次確實是非常短。在正常情況下，我們都希望色譜柱能使用更長久。為了確認是什么問題，我們需要先確定是否是你的方法導致了色譜柱壽命變短。

有兩種情況：

1. 用于相同測試的之前的色譜柱是否可以使用更長時間。

2. 是否所有用于該方法的色譜柱，在運行大約相同針數時，都出現了相同問題。

在di一種情況下，應確保測試的所有條件都是一致的。樣品組分是否發生了變化？樣品中有強烈吸附污染物破壞了色譜柱性能。儀器流路中的密封件是否完好？脫落的密封件是否會堵塞色譜柱的過濾器和頂層填料，從而影響樣品的分布。

如果能夠合理的確保色譜條件沒有發生任何變化，則可以保守的認為原因來源于填充床的物理損壞。包括在實驗室或者運輸過程中對色譜柱的粗暴處理（是否掉落？）或者是制造時產生的缺陷。此類缺陷無法通過標準色譜柱質量控制檢測到，只有在使用后才能夠顯現出來。這種情況，色譜柱生產商將免費更換色譜柱。

問：這些制造商很好，但這不是我的問題。我的色譜柱總是只能使用很短的時間。有時是100次進樣，有時是200次。我可以接收200次的進樣，但只有100次真的是太少了。花費太昂貴。我需要怎么做？

答：我*同意你的看法。我們一起要做的就是找到問題的原因，然后看看我們可以采取什么措施。

造成問題的可能原因是樣品成分吸附在色譜柱的頂部。可能由于他們在流動相中的溶解度低而沉淀，或者可能被強烈吸附。隨著注入越來越多的樣品，這些污染物會積聚在色譜柱的頂部，從而阻止樣品合理的吸附和分布。這導致峰型變差。通常，這個問題伴隨著背壓的增加。

問：好的，可能就是這樣。那么我該如何解決這個問題？

答：有幾種方法可以防止這種情況的發生。一種是使用合適的樣品制備技術來凈化樣品。使用具有類似化學性質的SPE柱為分離柱進行固相萃取可以很好地解決此問題。

另一種更好的方法是使用保護柱。預柱可以作為分析柱的頂部，在出現問題時將其替換。為了獲得好的性能，使用的保護柱應與分析柱具有*相同的填料，并以與分析柱相同的高性能填料技術進行填料。如果使用由不同品牌的填料制成的預柱，則在分離能力和保護分析柱方面都無法獲得好的性能。另外，請勿使用較大的粒徑。較大的顆粒或填充不好的預柱會導致譜帶展寬，分離效果下降。

問：使用保護柱聽起來不錯。還有其他解決方案嗎？

答：嗯，是的。還有其他幾種可能性，但是它們都有缺點。

我不是提倡使用可能會溶解色譜柱頂部污染物的溶劑進行“沖洗”的方法。在許多情況下，此過程根本行不通。例如，如果沉淀在柱頂上的污染物是蛋白質，那么當您嘗試將其沖洗時，由于變性甚至交聯，因此可能無法再次溶解它們。此外，每次沖洗也將會移除水解鍵合相，否則該鍵合相在發生水解的位置處保持局部平衡。因此，重復沖洗實際上可以導致色譜柱加速老化。同樣在沖洗后，必須用流動相重新平衡色譜柱，在某些情況下（如離子對色譜）可能會花費大量時間。

另一種經常嘗試的方法是反沖洗。如果你用的溶劑不同于流動相，那么同樣的反對理由也適用于色譜柱清洗。如果你只使用流動相，則需要很長的時間將污染物出去或可能根本不起作用。而且，任何反沖洗都會削弱色譜柱的性能。雖然現在的色譜柱填裝的都很好，可以承受反沖洗，但我還是要重申，這不是一個標準做法。

問：所以，建議是使用預柱？

答：是的。它們的價格不貴-視品牌和類型而定，在10到50美元之間-并且它們保護的色譜柱通常成本是其十倍左右。此外，它還可以保護色譜柱免受其他更難追蹤來源的污染物的侵害。你的色譜柱問題的根源可能是例如流動相中的灰塵或泵密封墊脫落造成的碎屑導致。也可能是流動相中污染物的吸附。其中一些可能很難解決，但是預柱能夠更好的解決這些問題。

問：還有其他導致色譜柱壽命縮短的原因嗎？

答：是的，但是如果您聽從制造商的建議，則不太可能。

一種可能是由于流動相pH值超出建議范圍而導致色譜柱塌陷。這也可能是由于樣品溶解在強酸或堿性溶液中引起的。

此外，還有一些色譜柱用于特定的項目。

例如氨基柱與醛和酮會發生反應。在無緩沖的水溶液中的氨基柱會產生強堿性，導致部分硅膠溶解。

如果使用了錯誤的溶劑，色譜柱也會塌陷。原因是色譜柱從根本上說是非常松散的結構。它們通過顆粒彼此的粘附而部分地保持在一起。當將其置于能夠破壞這種粘附力的流動相中時，塌陷的可能性就會增加。這偶爾會發生在中等極性溶劑中的氰基柱或THF中的苯基柱。

另一個原因遠離色譜柱“清洗”。 

小 結

導致色譜柱壽命短的原因，可能樣品原因，物理損壞以及不合理的使用：

如果是樣品原因可對樣品進行預處理，或者使用預柱（*），另外也可以清洗和反沖洗（不推薦）。

物理損壞是不可逆的，需要更換色譜柱。

不合理的使用包括超出pH使用范圍，使用錯誤的溶劑，以及部分色譜柱只能用于特定項目。