疏水相互作用色譜
疏水相互作用色譜 (Hydrophobic Interaction Chromatography，簡稱HIC) 是一種蛋白質(zhì)分離、純化和表征的傳統(tǒng)技術(shù)。近些年來，隨著單克隆抗體、雙抗、三抗以及抗體偶聯(lián)藥物 (ADC) 的不斷發(fā)展，HIC 在抗體以及抗體偶聯(lián)藥物的表征與分析上應(yīng)用越來越廣泛。
疏水作用色譜的方法開發(fā)
疏水作用色譜的方法開發(fā)一方面是色譜柱的選擇，一方面是方法的優(yōu)化。
與其他技術(shù)不同，疏水作用色譜技術(shù)允許蛋白質(zhì)在非變性條件下保持天然結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。利用抗體蛋白類藥物疏水相互作用色譜根據(jù)疏水性的不同進(jìn)行分離。
色譜柱選擇方面，疏水作用色譜柱的填料基質(zhì)和鍵合相都可以影響選擇性。對于填料基質(zhì)而言，常見的HIC色譜柱既有硅膠基質(zhì)的，也有聚合物基質(zhì)。而鍵合相的差異，則主要影響疏水性，常見鍵合相的疏水性從弱到強(qiáng)依次是：丁基<辛基<苯基。
方法優(yōu)化方面，疏水相互作用色譜一般是運(yùn)行鹽梯度。高濃度的緩沖鹽，由于“占據(jù)水分子"導(dǎo)致蛋白質(zhì)疏水內(nèi)核發(fā)生翻轉(zhuǎn)，疏水殘基暴露出來，與鍵合相相互作用，而緩沖鹽濃度降低的時(shí)候，疏水殘基可逆的進(jìn)行翻轉(zhuǎn)，疏水作用減弱，從而洗脫。蛋白質(zhì)分子按其疏水性大小被依次洗脫出來，疏水性小的先流出。具體的方法受到離子強(qiáng)度、溶劑種類、溫度以及pH值的影響。
聚合物無孔HIC色譜柱
Shim-pack Bio HIC可用在低壓力下實(shí)現(xiàn)ADC的DAR高分辨率分析。
ADC藥物DAR分析
檢測條件
系統(tǒng): Inert LC（1.6 mL混合器）
工作站: LabSolutions™ LC/GC
色譜柱: Shim-pack Bio HIC (100mm.x 4.6 mmI.D., 4µm)
流動(dòng)相:
A) 50mM NaH2PO4-Na2HPO4（pH 7.0）含有1.5M（NH4）2SO4/2-丙醇（95/5）
B) 50mM NaH2PO4-Na2HPO4（pH 7.0）/2-丙醇（80/20）
梯度: 0%B (0-1min), 0-100%B (1-18min), 100%B (18-23min)
流速: 1.0mL/min
進(jìn)樣量: 5µL
柱溫: 25°C
檢測器: 280nm (PDA)
樣品: Cysteine-liked ADC Mimic (5 mg/mL)
Peak area reproducibility（n = 6）
峰使用i-peak finder（LabSolutions的峰值積分算法）自動(dòng)進(jìn)行積分。
產(chǎn)品信息
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