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上海研謹生物科技有限公司

土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶試劑盒說明書

時間:2021-6-9閱讀:1558
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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase,

S-NAG試劑盒說明書

分光光度法 50 /24

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

S-NAG 是溶酶體中的一種酸性水解酶,由土壤微生物分泌。S-NAG 活性變化與機體某些病理狀態密切相關。

測定原理:

S-NAG 分解 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在 400nm 有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算NAG 活性。

自備用品:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自備)

試劑二:粉劑×2 瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入 6mL 蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20℃保存;

試劑三:液體 25mL×1 瓶,4℃保存; 試劑四:液體 50mL×1 瓶,4℃保存; 樣品處理:

新鮮土樣自然風干或 37 度烘箱風干,過 30~50 目篩。

測定步驟:

試劑名稱

測定管

對照管

風干土樣(g

0.05

0.05

試劑一(μL

25

25

 

室溫振蕩混勻 15min

90℃振蕩混勻 15min

試劑二(μL

400

 

蒸餾水(μL

 

400

試劑三(μL

500

500

混勻, 37℃振蕩反應 1h 后,立即 90℃水浴 5min蓋緊,防止水分散失,流水冷卻 10000g 25℃離心 10min,取上清液

上清液(μL

500

500

試劑四(μL

1000

1000

充分混勻,室溫靜置 2min 后,400nm 處蒸餾水調零,測定吸光值 A,計算 ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一個對照管。

S-NAG 活力計算:

標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.00645x -0.0054x 為標準品濃度μmol/Ly 為吸光值。單位的定義:每天每 g 土樣中產生 1 μmol -硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-NAG 活力(μmol/d/g 土樣)= (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V 反總÷W÷T =68.84×(ΔA+0.0054)

T:反應時間,1h=1/24d V 反總:反應體系總體積:9.25×10-4 LW:樣本質量,0.05g

 

 

實驗代做服務:

 

WB代做

HE染色

免疫熒光染色

蛋白相互作用分析

ELISA免費代檢測

免疫組化

熒光定量PCR

番紅O固綠染色

流式細胞檢測

激光共聚焦

透射電鏡服務

DNA甲基化實驗

免疫共沉淀(Co-IP

DNA甲基化

掃描電鏡實驗

microRNA 測序

半定量RT-PCR

分子克隆和質粒載體構建服務

原位雜交(FIsh)

石蠟/冰凍切片

RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP

CCK8檢測

蛋白雙向(2-D)電泳

蛋白雙向2D-WB

ATP/ADP檢測

Taqman探針

細胞劃痕

基因組DNA提取

 

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