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上海研謹生物科技有限公司

蔗糖磷酸合成酶(SPS)試劑盒操作說明書

時間:2021-6-9閱讀:1732
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蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate synthaseSPS)試劑盒說明書

微量法

正式測定管前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義

蔗糖不僅是重要的光合產物,也是植物體內運輸的主要物質,還是碳水化合物的貯存形式之一。SPSEC 2.4.1.14)以果糖-6-磷酸為受體,形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系統看作是蔗糖合成的主要途徑。

測定原理

蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖磷酸與間苯二酚反應可呈現顏色變化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小與顏色的深淺成正比。

需自備的的儀器和用品

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰

試劑的組成和配制

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 2.5mL×1 瓶,-20℃保存;

試劑二:1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶,4℃保存;

試劑三:液體 2mL×1 瓶,4℃保存

試劑四:液體 25mL×1 瓶,4℃保存;

試劑五:液體 6mL×1 瓶,4℃保存;

樣品測定的準備:

按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至480nm,蒸餾水調零。

2、樣本測定(在 EP 管中依次加入下列試劑):

試劑名稱(μL)  

測定管  

對照管  

標準管  

空白管

樣本  

10  

10

 

 

蒸餾水  

 

45  

45  

55

試劑二  

 

 

10

 

試劑一  

45

 

 

 

混勻,25℃準確水浴 10min

試劑三  

15  

15  

15  

15

沸水浴中煮沸 10min 左右(蓋緊,以防止水分散失),冷卻

試劑四  

210  

210  

210  

210

試劑五  

60  

60  

60  

60

混勻,沸水浴30min,冷卻后,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,480nm下測定各管吸光值。標準管和空白管只要做一管。每個測定管需要設一個對照管。

SPS 活力單位的計算

1、按照蛋白濃度計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1μg蔗糖定義為一個酶活力單位。

SPS 活性(μg /min/mg prot)= {C 標準管×V1×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管))÷(V1×Cpr)÷T=100×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷Cpr

2、按照樣本鮮重計算

單位定義:每g組織每分鐘催化產生1μg蔗糖定義為一個酶活力單位。

SPS 活性(μg /min/g 鮮重) = {C 標準管×V1×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管))÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W

C 標準管:標準管濃度,1000μg/mLV1:加入反應體系中樣本體積,0.01mLV2:加入提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本鮮重,gT :反應時間:10min

 

 

實驗代做服務:

 

WB代做

HE染色

免疫熒光染色

蛋白相互作用分析

ELISA免費代檢測

免疫組化

熒光定量PCR

番紅O固綠染色

流式細胞檢測

激光共聚焦

透射電鏡服務

DNA甲基化實驗

免疫共沉淀(Co-IP

DNA甲基化

掃描電鏡實驗

microRNA 測序

半定量RT-PCR

分子克隆和質粒載體構建服務

原位雜交(FIsh)

石蠟/冰凍切片

RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP

CCK8檢測

蛋白雙向(2-D)電泳

蛋白雙向2D-WB

ATP/ADP檢測

Taqman探針

細胞劃痕

基因組DNA提取

 

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