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速率散射比濁法檢測補體C3、C4
補體(complement,C)是由近20種不同血清蛋白組成的多分子系統,約占血清球蛋白總量的10%。補體在血清中的含量相對穩定,不因免疫應答而增加,僅在某些病理情況下才會發生波動。補體系統的基本組成包括9種血清蛋白成分,按發現的先后順序而分別命名為C1-9。補體是一個復雜的反應系統,除了溶解細胞和協助殺菌作用外,還可促進炎癥反應,與其他生物活性系統有相互促進、相互制約的關系,這些關系的紊亂是導致許多疾病損傷的物質基礎。C3是一種β球蛋白,是補體中含量zui多、作用zui重要的一個組分,是補體兩條主要激活途徑的中心環節,有重要的生物活性作用,可在肝臟中產生。C4是由肝臟、巨噬細胞合成的,參與經典激活途徑,是補體中含量僅低于C3的重要組分。常用檢測方法為速率透射比濁法、速率散射比濁法等。
[檢測方法] 速率散射比濁法
[方法學原理] 抗原(C3、C4)與抗體(抗C3、抗C4)在液相中可快速反應,形成的免疫復合物顆粒具有特殊的光學特性,使反應液出現濁度。速率是指單位時間內抗原、抗體形成免疫復合物的速度。隨著時間的延長免疫復合物總量是逐漸增加的,而速率變化為慢+快一慢,其反應速率zui快的某一時間稱為速率峰。當反應體系中的抗體量過剩時,速率峰的高低只與C3、C4含量成正比,儀器將測得的速率峰值通過對應的標準曲線轉換成相應的C3、C4濃度。
[標本準備] 空腹靜脈血2ml,不抗凝。
[試劑] 免疫比濁儀配套C3、C4試劑盒,內含有稀釋液、緩沖液、抗血清等,按說明書配制。
[儀器] 全自動特種蛋白分析儀。
[檢測步驟]
1.標本處理,3 500rpm離心lOmin,分離血清。
2.根據操作程序進行樣品測定:
(1)輸入杯號;
(2)選擇所測項目C3、C4;
(3)存盤;
(4)編程完畢后,將標本放人標本杯中,且放入標本盤中相應位置,將所做項目的試劑放人試劑盤中相應位置,確認無誤后,開始運行特種蛋白分析儀。
[正常參考值] C3:0.8~1.
[注意事項]
1.試劑盒從冷藏環境中取出時應置室溫環境中平衡。
2.試劑瓶蓋打開時應注意打破瓶口的液膜,以防液感儀感應錯誤。
3.血清中若含有脂類應高速離心分離脂質,防止假濁度產生。
[臨床意義] 在感染性疾病中,急性感染期可見C3、C4增高。由于補體在肝細胞中合成,所以重癥病毒性肝炎、慢性病毒性肝炎,特別是轉化為肝硬化后,C3、C4水平均下降。
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