全自動酶免疫分析儀的基本原理和測定模式

    目前絕大部分全自動免疫分析儀所采用的測定原理是酶免疫試驗，這些分析儀又可稱為全自動酶免疫分析儀，這一類分析儀根據其所用試劑是否為，又可分為試劑“限定”和試劑“開放”兩類，試劑開放的全自動酶免疫分析儀相對較少，如BIO-RAD公司的CODA和Per—sonal Lab等；而試劑限定的全自動酶免疫分析儀則種類較多，如Roche公司的COBASeCOREⅡ和ENZYME SYSTEM（ES），ABBOTT公司的AXSYM@和IMX，生物梅里埃的VIADS@，強生公司的VitrosECi@，BECKMANCOULTER公司的Access@和DPC公司的IMMULITE④2000等。這兩類全自動酶免疫分析儀均采用ELISA測定的基本原理，尤其是試劑開放類，其只不過是將加樣、溫育、洗板等ELISA基本測定過程由手工操作改為機器操作而已。如果根據zui后的酶與底物的反應產物，又可將全自動酶免疫分析儀分為顯色測定、熒光測定和發光測定三類。根據標記用酶也可分為辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶標記類。本處主要按照顯色、熒光和發光測定方式對試劑限定的全自動酶免疫分析儀的基本測定原理和模式作一介紹。

一、顯色測定類

    Roche公司的COBASeCOREⅡ和ENZYME SYSTEM（ES）全自動酶免疫分析系統

    Roche公司的COBAS*COREⅡ全自動酶免疫分析系統以塑料珠（直徑0．6cm）作為固相載體，以辣根過氧化物酶（HRP）作為標記用酶，顯色底物為四甲基聯苯胺（TMB）。在固相上每完成一次抗原抗體結合反應，儀器內所安有特殊的洗滌裝置即可快速滾動清洗塑料珠，以去除未結合的抗原、抗體和酶結合物。ES型全自動酶免疫分析系統則以鏈霉親合素包被的聚苯烯塑料小管為固相載體，擬固相化的抗體或抗原可通過生物素而間接吸附，這種抗體或抗原的匿相化技術zui初是Boehringer-Mannheim公司的。本系統的標記用酶也是HRP，但底物有所不同，用的是ABTS。

二、熒光測定類

    （一）ABBOTT公司的IMX和AXSYM~全自動酶免疫分析系統

    ABBOTT公司的IMX全自動酶免疫分析系統所采用的固相為表面多孔的塑料微顆粒，直徑0．5tzm。標記用酶為堿性磷酸酶，酶底物為4—甲基傘型酮磷酸鹽（4—MUP），由于4—MU正在堿性磷酸酶的作用下生成4—甲基傘型酮，其在360nm激發光的照射下，發出448nm熒光，因而zui終根據所產生的熒光強度來計算所測物質的濃度。值得提一下的是這種酶免疫分析系統的洗滌分離過程，即抗原抗體結合反應在塑料微顆粒固相上完成后，儀器將微顆粒轉移至特定的玻璃纖維上，加入洗滌緩沖液，沒有結合的抗原或抗體被洗滌下去，而結合于塑料微粒固相上的抗原抗體則因微粒與玻璃纖維的不可逆結合而保留在玻璃纖維上。因此，這種洗滌分離的效果較好。

    ABBOTT公司的AXSYM*全自動免疫分析系統其實是IMX和TDX（采用熒光偏振免疫分析方法）兩種免疫分析儀的綜合，因此，這種全自動免疫分析系統除了能進行IMX所具有的酶免疫分析外，還能進行TDX的熒光偏振免疫分析，對于臨床一些小分子如藥物的測定更為方便。

    （二）生物梅里埃的VIADS@全自動酶免疫分析系統

    該分析系統的測定基本原理與ABBOTT公司的IMX有些類似，即其也是以堿性磷酸酶作為標記用酶，以4—MUP作為酶的熒光底物，zui后檢測的也是熒光。所不同的是該系統的反應固相為塑料吸頭（solidphasepeceptacle，SRP）的內表面，通過儀器自動進行地抽吸，而在吸頭內表面完成抗原抗體結合反應、洗滌分離和熒光激發過程。

三、發光測定類

    （一）強生公司的VitrosECi@全自動增強化學發光酶免疫分析系統

    該酶免疫分析系統以子彈頭型小孔管為固相載體，HRP為標記用酶，底物魯米諾為HRF的發光底物，本系統使用了化學發光增強劑3—氯—4—羥基乙酰苯胺，其不但使化學發光強度比單獨魯米諾發光強，而且穩定，并持續時間長，增加了測定的敏感性。該測定系統的固相載體表面亦預先包被了鏈霉親合素，抗體或抗原通過生物素而間接吸附。

    （二）BECKMANCOULTER公司的Access@全自動微粒子化學發光酶免疫分析系統

    該系統以核心為三氧化二鐵外包聚苯烯的順磁性微粒子作為固相載體，以堿性磷酸酶作為標記用酶，使用一種新型的堿性磷酸酶底物AMPPD（dioxetanes）作為發光底物，這種底物的分子結構中有兩個重要部分：一個是連接苯環和金剛烷的二氧環，它可以斷裂并發射光子；另一個是磷酸基團，它維持整個分子結構的穩定。在堿性磷酸酶的作用下，這種底物迅速脫去磷酸基團，生成不穩定的中間體AMPD。AMPD很快自行分解，從高能激發態回到低能穩定態，同時發出光子。這種化學發光穩定，持續時間可達數小時，容易測定，也容易控制。由于該系統的固相為順磁顆粒，在加入電磁場時，顆粒會迅速下沉吸附，達到固相與液相的分離，洗滌分離簡單快速，加快了整個測定系統的測定速度。

    （三）DPC公司的IMMULITE⑦2000全自動化學發光酶免疫分析系統

    該系統以聚苯烯塑料珠為固相載體，以堿性磷酸酶作為標記用酶，同樣以AMPPD為底物。將未結合的抗原或抗體及酶結合物從固相洗去的方法是離心洗滌。

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