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中級(jí)會(huì)員 | 第16年

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臺(tái)盼藍(lán)之細(xì)胞染色

時(shí)間:2009/12/31閱讀:9838
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臺(tái)盼藍(lán)(Trypan Blue,也稱Direct blue 14):一種死細(xì)胞染色用色素

化學(xué)名:
3,3'-{[3,3'-Dimethyl(1,1'-biphenyl)-4,4'-diyl]bis(azo)}bis(5-amino-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic acid), tetrasodium salt3,3’-{[3,3’-二甲基-(1,1’-二苯基)-4,4’-二基]雙(偶氮)}-雙(5-氨基-4-羥基-2,7-萘二磺酸),四鈉鹽

分子式:C34H24N6Na4O14S4
分子量:960.81
CAS Number: 72-57-1
外觀:黑褐色結(jié)晶粉末
摩爾吸光度:>69,000(在606nm附近)

染色原理:
細(xì)胞損傷或死亡時(shí),臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜,與解體的DNA 結(jié)合,使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以鑒別死細(xì)胞與活細(xì)胞。嚴(yán)格來(lái)說(shuō),臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)的是細(xì)胞膜的完整性,通常認(rèn)為細(xì)胞膜喪失完整性,即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡。這被稱為染料排除測(cè)試(dye exclusion),Erythrosin B(紅色)、negrosine、eosin Y、AO和EB也用于此目的。通過(guò)顯微鏡很容易就能識(shí)別出死亡的被臺(tái)盼藍(lán)染色的細(xì)胞,并可使用細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。

溶于水,可以配制成10mg/ml的水溶液,水溶液呈深藍(lán)色。
臺(tái)盼藍(lán)主要用來(lái)鑒定原代培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),細(xì)胞分離后的存活情況,用0.4%臺(tái)盼藍(lán)直接染色5-10分鐘,在顯微鏡下觀察即可。

應(yīng)用于細(xì)胞凋亡:
如果細(xì)胞膜不完整、破裂,臺(tái)盼藍(lán)染料進(jìn)入細(xì)胞,細(xì)胞變藍(lán),即為壞死。如果細(xì)胞膜完整,細(xì)胞不為臺(tái)盼藍(lán)染色,則為正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞。盡管在凋亡的早期到中期檢測(cè)是很困難的,此方法對(duì)反映細(xì)胞膜的完整性,區(qū)別壞死細(xì)胞有一定的幫助。

儲(chǔ)存條件:常溫保存

注意事項(xiàng):
1. 臺(tái)盼藍(lán)對(duì)人體有毒
2. 臺(tái)盼藍(lán)染細(xì)胞時(shí),時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。否則,部分活細(xì)胞也會(huì)著色,會(huì)干擾計(jì)數(shù)。
3. 臺(tái)盼藍(lán)染色法對(duì)于懸浮細(xì)胞來(lái)說(shuō),還比較方便,對(duì)貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō),較為繁瑣。因?yàn)橐袝r(shí),96孔板不一定能消化干凈。而且,該法是測(cè)定細(xì)胞濃度的方法,與細(xì)胞懸液的體積有關(guān),加入的胰蛋白酶或1640要計(jì)入終體積。可以說(shuō),該法相對(duì)準(zhǔn)確,可能有一些人為因素的干擾。

 

臺(tái)盼藍(lán)染色
通常認(rèn)為細(xì)胞膜喪失完整性,細(xì)胞即可被認(rèn)為已經(jīng)死亡。臺(tái)盼藍(lán)(Trypan Blue)是檢測(cè)細(xì)胞膜完整性zui常用的生物染色試劑。健康的正常細(xì)胞能夠排斥臺(tái)盼藍(lán),而死亡的細(xì)胞,膜的完整性喪失,通透性增加,細(xì)胞可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。依據(jù)此原理,細(xì)胞經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色后,可通過(guò)顯微鏡,直接鏡下計(jì)數(shù)或拍照后計(jì)數(shù),實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞存活率比較的定量分析。  
     賽馳生物開(kāi)發(fā)的細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒(Cell Viability Assay Kit)以進(jìn)口試劑為原料精心配制而成。該產(chǎn)品使用方便,操作簡(jiǎn)單,全部操作只需3-5分鐘即可完成。本產(chǎn)品還配有細(xì)胞稀釋液,以便用戶在細(xì)胞密度較高時(shí),可以很方便的進(jìn)行計(jì)數(shù)細(xì)胞的稀釋。   
包裝清單

細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒

130000-T

130000-T1

130000-T2

臺(tái)盼藍(lán)染色試劑

5ml

10ml

30ml

細(xì)胞稀釋液

30ml

60ml

120ml

說(shuō)明書(shū)

1份

1份

1份

保存條件
     4℃、無(wú)菌、密封保存,一年有效。
使用說(shuō)明
    1.收集細(xì)胞
     貼壁細(xì)胞    先用胰酶和/或EDTA消化,吹打分散成單個(gè)細(xì)胞懸液;
     懸浮細(xì)胞    直接吹打瓶底使成細(xì)胞懸液;
     收集細(xì)胞懸液,用細(xì)胞稀釋液適當(dāng)稀釋;或離心棄上清,估測(cè)細(xì)胞數(shù)量,向沉淀中適量加入細(xì)胞稀釋液,吹打重懸細(xì)胞。
     2.臺(tái)盼藍(lán)染色
     吸取100微升細(xì)胞懸液到EP管內(nèi),加入臺(tái)盼藍(lán)染色液100微升,輕輕吹打混勻,3-5分鐘(染色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng))后滴板計(jì)數(shù)。  
     3.細(xì)胞存活率分析
     吸取適量加有臺(tái)盼藍(lán)染色液的細(xì)胞懸液,滴加血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。于大方格內(nèi)分別計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)和藍(lán)染細(xì)胞數(shù)。
     細(xì)胞存活率=(細(xì)胞總數(shù)-藍(lán)色細(xì)胞數(shù))/細(xì)胞總數(shù)X100%。
     注意事項(xiàng)
     本產(chǎn)品所提供的兩種溶液均經(jīng)過(guò)濾除菌,取用時(shí)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行,以免微生物污染。  
     染色試劑具有潛在的致癌性,為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

 

 

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