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紅酒中八種合成著色劑檢測

閱讀：1226      發布時間：2012-6-25
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一、樣品信息

樣品組分

結構式

檸檬黃

新紅

 

莧菜紅

靛藍

胭脂紅

 

日落黃

誘惑紅

 

亮藍

二．實驗目的

參照《食品中合成著色劑的測定》（GB/T5009.35-2003），建立紅酒中的合成著色劑的SPE-HPLC檢測方法。

三．實驗方法

3.1實驗試劑

l          乙酸；
l          甲醇；
l          乙酸銨溶液（0.02mol/L）：稱取1.54g乙酸銨，加水溶解并稀釋至1000mL；
l          氨水溶液：量取氨水2mL，加水至100mL，混勻；
l          甲醇/甲酸（6+4）溶液：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混勻；
l          檸檬酸溶液：稱取20g檸檬酸，加水至100mL溶解，混勻；
l          無水乙醇-氨水溶液-水：量取無水乙醇70mL，氨水溶液20mL、水10mL，混勻；
l          水（PH=6.0）：水加檸檬酸溶液調節PH=6.0；
l          水（PH=4.0）：水加檸檬酸溶液調節PH=4.0；
l          水：超純水
l          合成著色劑儲備液：每1.0mL中含檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、亮藍各0.5mg，誘惑紅0.1mg的水溶液；
l          合成著色劑使用液：上述合成著色劑儲備液逐級稀釋成每1.0mL中含檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、亮藍各5μg，誘惑紅1μg的水溶液；
l          Cleanert® JXA SPE小柱：規格為1g/6mL，使用前經5mL甲醇和5mL pH=6.0的水活化。

3.2.實驗耗材

名稱
規格
訂貨號
Venusil® XBP C18
5μm，100A，4.6*150mm
VX951505-0
保護柱芯
4.6*10mm，4/pk
VX950105-0
保護柱套
適用于4.6*10mm的保護柱芯
CH-100
Cleanert® JXA
1g/6mL，30/盒
JXA0006
Hydrophilic PTFE
0.45μm，13mm，100/包
AS081345

3.3.試樣處理

取試樣（某品牌紅酒）20mL,加入合成著色劑混標溶液1.0mL，混勻，用10%氨水調節PH約6.0，將全部試樣經過Cleanert® JXA柱，分別用水（PH=4.0）、甲醇/加酸（6+4）溶液6mL淋洗，再用10mL水淋洗，用乙醇-氨水溶液-水（7+2+1）6ml洗脫，收集洗脫液于50℃水浴蒸發至干，加水定容至1.0mL，經0.45μm濾膜過濾，待測。

3.4液相色譜條件

色譜柱：Venusil® XBP C18，5μm；4.6*150mm；
流動相：A：0.02mol/L的乙酸銨溶液（乙酸調節pH=4）；
        B：甲醇
流  速：1.0mL/min；
進樣量：20μL；
波  長：254nm；
梯  度：
時間
A%
B%
0
95
5
10
80
20
18
40
60
25
40
60
25.01
95
5
40
95
5

四．實驗結果

表1.添加5ppm混標峰面積數據
樣品組分
標品
標樣過柱1
標樣過柱2
紅酒樣品1
紅酒樣品2
檸檬黃
318
320
315
294
324
新紅
471
474
461
482
473
莧菜紅
266
269
262
277
279
靛藍
314
282
279
273
275
胭脂紅
266
267
263
246
240
日落黃
234
238
234
210
212
誘惑紅
33
33
33
35
34
亮藍
39
40
39
37
37
表2.添加5ppm混標回收率數據
樣品組分
標樣過柱1（%）
標樣過柱2（%）
紅酒樣品1（%）
紅酒樣品2（%）
檸檬黃
100.6
99
92.5
102
新紅
100.6
97.8
102
100
莧菜紅
101
98.5
104
105
靛藍
89.8
88.8
86.9
87.5
胭脂紅
100.3
98.8
92.5
90.2
日落黃
101
100
90
90.6
誘惑紅
100
100
106
103
亮藍
102
100
95
95

五、實驗結論

實驗結果表明，Cleanert® JXA小柱和Venusil® XBP C18液相色譜柱可以用于紅酒中的合成著色劑的檢測，該方法快速、準確。

六、注意事項

l          紅酒樣品呈弱酸性，在上樣之前要將其pH值調節至6左右，保證小柱可對合成著色劑有良好地吸附；
l          若樣品酒精度過高，建議在上樣前對樣品進行除醇處理；
l          SPE小柱凈化過程中，要注意對流速的控制，建議控制在1mL/min左右；
l          洗脫液氮吹復溶后，應選用水系濾膜過濾，防止因濾膜吸附造成樣品的損失，建議選用Agela Hydrophilic PTFE濾頭。

附錄：

圖1 5ppm混標溶液

圖2 5ppm混標過柱1

圖3 5ppm混標過柱2

圖4 紅酒空白圖譜

圖5 5ppm基質加標1

圖6 5ppm基質加標2

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