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胰腺病毒的凍干工藝研究

隨著基因治療研究的逐漸深入，作為其基礎的病毒載體研究也有了突飛猛進的發展。采用病毒載體的基因轉移技術治療人類疾病也從實驗室研究逐步進入到臨床試驗階段。腺病毒因其對人致病性小且不誘導癌變，宿主細胞廣，繁殖度高，裝載容量大，越來越多的應用于病毒載體的研究。但是腺病毒制品對溫度較為敏感，給運輸、保存帶來較大困難，這在很大程度上限制了其在臨床上的應用。

冷凍干燥技術廣泛應用于食品、醫藥、疫苗等，采用此技術可較好地保持產品原有的理化性質和生物活性，且有效成分損失極少，產品因含水量低而易于長期保存。近年來，國外陸續出現將冷凍干燥技術應用到病毒疫苗及腺病毒制劑研究中的報道。目前腺病毒的保存條件為 PBS緩沖液于 -20 ℃以下保存，經研究發現，在這種條件下的腺病毒在25 ℃保存8 h及4 ℃保存24 h活性均下降10倍左右。研究胰腺病毒的凍干技術，有利于更好地方便臨床應用。

1、材料與方法

1.1 實驗材料

1.2 蔗糖（分析純）；甘露醇注射液（藥用輔料）；明膠（BR，上海明膠廠）；L- 半胱氨酸（原料藥）；人血白蛋白。

1.3 實驗儀器

FD-503冷凍干燥機。

1.4 實驗方法

采用冷凍干燥方法，先將制品在 -40 ℃條件下預凍至 -35 ℃，真空度為10Pa以下，每2 h溫度上升5℃，至28℃左右保持3 h。凍干保護劑組分為 ：4% 明膠、5% 甘露醇、20%人血白蛋白及3%蔗糖。

3 結論

凍干過程一般包括預凍、升華干燥（第一階段干燥）、解吸干燥（第二階段干燥）。在研究腺病毒的凍干時，預凍十分重要，在預凍階段，降溫速度越快越好，這主要還是由凍干機的降溫性能決定的，而在此階段中，要掌握適宜的預凍時間，以確保抽真空之前所有的產品均已凍實，這樣就不致因抽真空而噴瓶，并且能減少“粗結晶”的出現，最終利于水分的控制。而在升華干燥階段，最關鍵的是要考慮在適宜的時間內使制品干燥成型，那就必須獲得最適宜的熱量以確保腺病毒制品的升華，這與真空度密切相關。真空度 <10 Pa，并在升華干燥階段將制品溫度維持在 5 ℃為最好。在解吸干燥階段，主要是去除產品的結合水分，應盡量將產品溫度迅速上升到設定的最高溫度，溫度過低，不能控制水分，溫度過高，對于腺病毒來說，又有失活的可能，在此階段將制品溫度維持在 28 ℃左右是最佳的。

• 實驗室真空冷凍干燥機

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