上海人和科學(xué)儀器有限公司
利用LUMiSizer評(píng)估高壓均質(zhì)對(duì)脂質(zhì)體囊泡穩(wěn)定性的影響
檢測(cè)樣品:脂質(zhì)體囊泡
檢測(cè)項(xiàng)目:穩(wěn)定性分析
方案概述:本實(shí)驗(yàn)采用傳統(tǒng)薄膜水化法輔助高壓均質(zhì)制備脂質(zhì)體,考察均質(zhì)壓力、均質(zhì)次數(shù)和膽固醇含量對(duì)脂質(zhì)體囊泡物理穩(wěn)定性的影響。
脂質(zhì)體同時(shí)具有包埋脂溶性和水溶性活性物質(zhì)的能力,極大提高了活性物質(zhì)的傳遞效率,其在食品工業(yè)領(lǐng)域中的研究受到越來越多的關(guān)注。由于磷脂易發(fā)生不可逆的氧化降解和脂質(zhì)體囊泡聚集沉降等現(xiàn)象,容易導(dǎo)致被包埋活性物質(zhì)的滲漏,極大限制了脂質(zhì)體在食品工業(yè)中的應(yīng)用。
目前已有研究利用果膠、蛋白質(zhì)、殼聚糖及其衍生物等食品生物大分子物質(zhì)對(duì)脂質(zhì)體膜表面進(jìn)行修飾,從而提高其理化穩(wěn)定性。但新殼層材料的引入提高了食品脂質(zhì)體的生產(chǎn)成本,使得制備工藝也更加復(fù)雜,規(guī)?;墓I(yè)生產(chǎn)容易因設(shè)備的限制導(dǎo)致產(chǎn)品質(zhì)量不理想。同時(shí)考慮到膳食膽固醇長(zhǎng)期過量攝入對(duì)人體的影響,如何控制脂質(zhì)體中膽固醇的用量,以期得到穩(wěn)定性良好且膽固醇相對(duì)含量偏低的脂質(zhì)體是本研究的主要目的。高壓均質(zhì)法作為乳劑傳遞體系常用的破碎乳化制備方法,對(duì)提高乳劑的物理穩(wěn)定性有重要作用,目前已在工業(yè)化生產(chǎn)中大規(guī)模應(yīng)用;因此在工業(yè)化生產(chǎn)中利用高壓均質(zhì)法制備食品脂質(zhì)體具備實(shí)際應(yīng)用的可能。
本實(shí)驗(yàn)采用傳統(tǒng)薄膜水化法輔助高壓均質(zhì)制備脂質(zhì)體,考察均質(zhì)壓力、均質(zhì)次數(shù)和膽固醇含量對(duì)脂質(zhì)體囊泡物理穩(wěn)定性的影響。
1. 材料和方法
1.1 高壓均質(zhì)法制備脂質(zhì)體
采用薄膜水化結(jié)合高壓均質(zhì)法制備脂質(zhì)體。準(zhǔn)確稱取1g大豆卵磷脂和適量的膽固醇,用25 mL的CHCl3將其全部溶解,40 ℃條件下利用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去CHCl3,待有機(jī)相在圓底燒瓶底部形成薄膜后加入100 mL PBS(0.05 mol/L、pH 7.0),利用超聲水浴將磷脂膜洗脫,制成粗脂質(zhì)體混懸液。利用高速剪切儀將粗脂質(zhì)體混懸液高速剪切分散1 min(10 000 r/min),最后經(jīng)由高壓均質(zhì)機(jī)分別在20~80 MPa條件下循環(huán)均質(zhì)1~6 次得到脂質(zhì)體制劑。
1.2 SLN物理穩(wěn)定性分析
使用 LUMiSizer®進(jìn)行測(cè)試,轉(zhuǎn)速:4000 rpm、測(cè)試時(shí)長(zhǎng):2h,時(shí)間間隔:20 s、溫度:25 ℃。以不穩(wěn)定性指數(shù)隨時(shí)間變化曲線以表示樣品在測(cè)試過程中的失穩(wěn)狀態(tài),不穩(wěn)定性指數(shù)越高代表體系越不穩(wěn)定,反之乳狀液穩(wěn)定。
2. 結(jié)果與分析
2.1 均質(zhì)壓力對(duì)脂質(zhì)體穩(wěn)定性的影響
圖1 不同均質(zhì)壓力制備的脂質(zhì)體透光率圖譜(A)及不穩(wěn)定性指數(shù)隨時(shí)間的變化曲線(B)
從圖1A透光率圖譜中可以看出,20 MPa和30 MPa處理后的脂質(zhì)體經(jīng)2 h測(cè)試后,樣品整體的透光率均有所增大,且不穩(wěn)定系數(shù)隨時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著增大,說明脂質(zhì)體的物理穩(wěn)定性相對(duì)較差。其中30 MPa處理樣品離心前后的透光率變化最大,與其粒徑和PDI增大的結(jié)果一致,脂質(zhì)體因更容易發(fā)生聚集沉淀而導(dǎo)致物理穩(wěn)定性降低。均質(zhì)壓力高于40 MPa時(shí),脂質(zhì)體樣品在測(cè)試過程中的透光率幾乎無明顯變化,且不穩(wěn)定系數(shù)的變化幅度也降低,說明脂質(zhì)體粒徑的降低對(duì)樣品物理穩(wěn)定性的提高有促進(jìn)作用。結(jié)合粒徑和PDI的數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體整體粒徑與樣品物理穩(wěn)定性有直接關(guān)系,降低脂質(zhì)體的粒徑可提高其在室溫條件下的貯藏穩(wěn)定性。
2.2 均質(zhì)次數(shù)對(duì)脂質(zhì)體穩(wěn)定性的影響
圖2 不同均質(zhì)次數(shù)制備的脂質(zhì)體透光率圖譜(A)及不穩(wěn)定性指數(shù)隨時(shí)間的變化曲線(B)
由圖2可知,在考察不同均質(zhì)次數(shù)處理后脂質(zhì)體的物理穩(wěn)定性時(shí)發(fā)現(xiàn),無高壓均質(zhì)處理的脂質(zhì)體,其物理穩(wěn)定性極差。經(jīng)過高壓均質(zhì)處理后,脂質(zhì)體的物理穩(wěn)定性顯著提高。但在50 MPa均質(zhì)壓力下,經(jīng)不同均質(zhì)次數(shù)形成的脂質(zhì)體樣品的透光率無顯著變化,說明提高均質(zhì)次數(shù)對(duì)脂質(zhì)體的物理穩(wěn)定性無顯著影響。綜合不同均質(zhì)壓力的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,當(dāng)高壓均質(zhì)形成脂質(zhì)體的粒徑低于150 nm時(shí),脂質(zhì)體樣品在測(cè)試過程中的物理穩(wěn)定性無明顯差異。
2.3 m(大豆卵磷脂):m(膽固醇)對(duì)脂質(zhì)體穩(wěn)定性的影響
圖3 不同大豆卵磷脂于膽固醇質(zhì)量比制備的脂質(zhì)體透光率圖譜(A)
及不穩(wěn)定性指數(shù)隨時(shí)間的變化曲線(B)
由圖3可知,m(大豆卵磷脂)∶m(膽固醇)=2∶1脂質(zhì)體的物理穩(wěn)定性最差,說明過多膽固醇的載入不利于高壓均質(zhì)后脂質(zhì)體物理穩(wěn)定性的提高,而適量膽固醇的載入對(duì)其物理穩(wěn)定性無顯著影響。從不穩(wěn)定系數(shù)曲線的局部放大圖中可以發(fā)現(xiàn),當(dāng)m(大豆卵磷脂)∶m(膽固醇)從10∶1降低至3∶1時(shí),曲線變化的斜率逐漸降低,說明適當(dāng)提高磷脂膜中膽固醇的相對(duì)含量對(duì)高壓均質(zhì)脂質(zhì)體物理穩(wěn)定性的提高有促進(jìn)作用。
3. 結(jié)論
(1)增加均質(zhì)壓力和均質(zhì)次數(shù)可顯著提高脂質(zhì)體囊泡的物理穩(wěn)定性,但均質(zhì)壓力和均質(zhì)次數(shù)分別高于50 MPa和3 次后,脂質(zhì)體囊泡物理穩(wěn)定性的提高效果不再顯著。
(2)m(大豆卵磷脂)∶m(膽固醇)=3∶1對(duì)未來利用高壓均質(zhì)法制備包埋有活性物質(zhì)的脂質(zhì)體在提高樣品穩(wěn)定性上有一定的參考價(jià)值。
(3)LUMiSizer分散體系分析儀,應(yīng)用STEP技術(shù),對(duì)配方穩(wěn)定性分析提供了快捷有效的工具。不僅可以同時(shí)檢測(cè)12個(gè)樣品,而且多波長(zhǎng)(近紅外865nm、藍(lán)光410nm)覆蓋多品類樣品的測(cè)試,為用戶可提供更多更深入的分析信息,極大提高了工作效率。
轉(zhuǎn)載自:LUM儀器
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