北京中檢維康生物技術有限公司
GB 31658.17-2021 多獸殘處理方案（CLOVER ® HLB凈化柱）
檢測樣品：豬肉
檢測項目：動物性食品中四環素類、磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量
方案概述：2022 年最新版食品安全抽檢實施細則更新了針對于牛、 羊、 豬、 雞的肌肉、 及肝、 腎組織中部分四環素類、 磺胺類和喹諾酮類的檢測方法——《GB 31658.17-2021 動物性食品中四環素類、 磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》，中檢維康參照該標準進行試驗， 并優化了部分參數， 建立了一份具有良好回收率及穩定性的方案
【概述】2022 年最新版食品安全抽檢實施細則更新了針對于牛、 羊、 豬、 雞的肌肉、 及肝、 腎組織中部分四環素類、 磺胺類和喹諾酮類的檢測方法——《GB 31658.17-2021 動物性食品中四環素類、 磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》，中檢維康參照該標準進行試驗， 并優化了部分參數， 建立了一份具有良好回收率及穩定性， 能滿足國標要求的 SPE-HPLC-MS/MS 方法， 可供參考。
【實驗/設備條件】
（ 1） 色譜條件
儀器： UPLC-MS/MS（ Thermo Fisher TSQ Endura）
色譜柱： Hypersil GOLD C18 (2.1 mm×100 mm， 1.9 μm)
流動相： A： 水（ 0.1 %甲酸） B： 甲醇： 乙腈=2:8（ 0.1 %甲酸）
洗脫方式： 梯度洗脫， 見表 1
流速： 0.3 mL/min
柱溫： 35℃
進樣量： 10 μL
（2） 質譜條件
離子源： HESI
電噴霧電壓： 3500 V
鞘氣壓力： 40 arb
輔氣壓力： 2 arb
離子傳輸管： 380 ℃
輔氣溫度： 350 ℃
【樣品提取】
準確稱取粉碎均勻的肉類樣品 1 g（ 精確至 0.01 g） 于干凈離心管中， 加入 8 mL Mcllvaine-Na2EDTA 溶液， 渦旋混勻后超聲提取 20 min， -5℃ 下 120000 r/min 離心 5 min， 取出上清液于另一干凈離心管， 試樣殘渣加入 8 mL 磷酸鹽緩沖液， 同上述操作， 合并兩次提取液， -5℃ 下 120000 r/min 離心 5 min， 上清液待凈化。
Mcllvaine-Na2EDTA 緩沖液： 取檸檬酸·一水 12.9g、 磷酸氫二鈉·十二水 10.9g、 乙二胺四乙酸二鈉·二水 39.2g,加水 900mL,用 1mol/L 的氫氧化鈉溶液調節 pH 至 5.0± 0.2， 用水稀釋至 1000mL。
磷酸鹽緩沖液： 取 0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液 190 mL,用 0.05 mol/L 磷酸氫二鈉溶液稀釋至 1000mL。
【實驗/操作方法】
二、 樣品凈化（Clover ®HLB， 200mg/6mL）
活化： 固相萃取柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。
上樣： 取上述待凈化液加入活化好的固相萃取柱中。
淋洗： 依次用 5 mL 水， 5 mL 5%甲醇-水溶液， 抽干。
洗脫： 用 8 mL 甲醇： 乙酸乙酯： 氨水=50:50:2 溶液進行洗脫。
收集全部洗脫液， 45℃ 下氮吹至 100 μL 左右， 加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,過 PTFE 親水濾膜， 上機測試。
三、 基質標準曲線溶液的制備
取 6 個空白基質樣品同正常樣品一樣操作， 收集洗脫液后， 于洗脫液中分別加入適量標液， 再與其他樣品洗脫液一同氮吹， 定容， 使最終上機溶液的濃度分別為 2 μg/L、 10 μg/L、 50 μg/L、 100 μg/L、 200μg/L、500 μg/L。
優化 步驟：
1. 在提取過程中降低離心的溫度至-5℃可以更好的制樣品中的脂肪在水溶液表面的分散， 有利于樣品的提取轉移。
2. 在超聲提取完合并兩次的提取液之后， 再進行一次離心， 更好的去除基質的影響， 便于上樣過柱。
3. 在淋洗過程中使用 5 mL 5%甲醇-水溶液淋洗液， 可以減少在淋洗過程中部分目標物的損失。
4. 標準中氮吹至 100 μL 左右， 不氮吹干可以減少在氮吹過程中部分目標化合物的損失。
5. 復溶時， 加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目標化合物的峰型， 同時提高部分化合物的回收率。
6.為了改善上樣后的流速問題， 使用Clover ® HLB (貨號 ： HLB2006-M)較普通的 HLB 凈化柱可以獲得更好的流速。
【儀器/耗材清單】
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