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Tris飽和酚配制及作用

閱讀:6213      發(fā)布時(shí)間:2016-12-2
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Tris 飽和酚是用 Tris-HCl(pH8.0)飽和過的重蒸酚,為淺黃色透明液體,有刺激性氣味,上層為 Tris 鹽酸緩沖液,pH>7.8,下層為酚相,內(nèi)加有抗氧化的 8-羥基喹啉。Tris 飽和酚用于分離 DNA。

   Tris 飽和酚的配置:冰箱取出重蒸酚,室溫放置,之后 68 度水浴溶化,切勿立即放入 68度的水浴中,以防玻璃炸裂,加 8-羥基喹啉 0.1%和β-巰基乙醇 0.2%,(原液14.4MOL/ML),混勻,溶液呈現(xiàn)黃色,倒入分液漏斗中(也可在燒杯中進(jìn)行)加入等溶劑的 1MOL/ML 的 Tris(PH8.0),反復(fù)混勻后,靜分層;放出下層黃色酚液,棄上層、加固體Tris 約 1g/100ml,搖勻,去水相、加 0.1MOL/ML Tris(PH8.0)平衡數(shù)次, PH 為 8.0、0.1MOL/ML Tris(PH8.0)于棕色瓶中 4 度保存。

  組織裂解液,確保 pH 為 8.0 左右(可加入 0.1 體積的 1M Tris-HCl,pH8.0,將其調(diào)為 8.0 左右),再加入 0.5 體積的 Tris 飽和酚(使用時(shí)靜置,取下層酚相使用。上層為Tris-HCl 溶液,是為阻止酚與空氣接觸,以減緩酚的氧化),0.5 體積CCL4:異戊醇(24:1) ,振蕩 10 秒鐘后冰浴 15 分鐘。離心后取水相(上層)加等體積異丙醇沉淀 DNA,75%乙醇漂洗 1 次,微干燥后溶于適量 TE 中備用。

  Tris 飽和酚一般 PH 大于 7.8,用于 DNA 的提取。其中,酚是強(qiáng)的蛋白變性劑,可以使細(xì)胞或組織中的蛋白質(zhì)變性析出,而 Tris 的主要作用是防治止酚類氧化,若酚類氧化,則會(huì)形成醌(兩個(gè)苯環(huán)),醌含有強(qiáng)自由基,會(huì)破壞核酸結(jié)構(gòu)。同時(shí),由于 PH 值大于 7,在堿性環(huán)境中 DNA 處于水相,RNA 處于有機(jī)相,從而分離上清,即可得到 DNA。

  Tris 平衡酚有較強(qiáng)的腐蝕性,應(yīng)盡量避免皮膚接觸或吸入體內(nèi)。如發(fā)現(xiàn)變?yōu)榧t色或棕色,表明已發(fā)生氧化,不能繼續(xù)使用。

  北京索萊寶科技有限公司自產(chǎn)產(chǎn)品 Tris 飽和酚又名 Tris 平衡酚,在堿性條件下(pH>7.8)用于 DNA 的提取

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