收到貨后如何保存？

將本產(chǎn)品置于-20℃環(huán)境存放；若短暫放置，4 ℃不超過(guò)7天。

能否反復(fù)凍融？

不建議反復(fù)凍融；融化后立即分裝（200 µL/管），-20 ℃保存。

如何進(jìn)行融化？

冷凍狀態(tài)的基質(zhì)膠可以在操作前一天埋藏于碎冰中，再轉(zhuǎn)移入4 ℃冰箱，次日即可使用。適當(dāng)延長(zhǎng)4℃融化時(shí)間可以有效減少基質(zhì)膠中的氣泡。

含酚紅

pH指示

常規(guī)實(shí)驗(yàn)都可以使用含酚紅產(chǎn)品，由于酚紅存在時(shí)，在溫度、pH不同的情況下液體會(huì)出現(xiàn)顏色的差異，顏色可以在明黃色至暗紅色之間變化。

無(wú)酚紅

無(wú)顏色干擾

涉及顏色檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)，推薦使用不含酚紅的基質(zhì)膠，如對(duì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)必須使用不含酚紅的基質(zhì)膠。此外，酚紅是一種潛在的內(nèi)分泌干擾物，有可能會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)激素的自然產(chǎn)生和代謝能力。

標(biāo)準(zhǔn)濃度

蛋白濃度：8 - 12 mg/mL

Transwell實(shí)驗(yàn)、皮下成瘤實(shí)驗(yàn)

高濃度

蛋白濃度：18 - 22 mg/mL，凝膠3-5 min

皮下成瘤中較難成瘤的細(xì)胞系

低生長(zhǎng)因子

標(biāo)準(zhǔn)濃度基質(zhì)膠的基礎(chǔ)上做了減生長(zhǎng)因子處理

類(lèi)器官培養(yǎng)、血管生成

皮下成瘤

荷瘤不成功可能的原因

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá) 80 - 90% 左右密度為宜

選擇 4 - 6 周齡裸鼠，小于 4 周可能不耐受過(guò)早死亡，大于 6 周免疫力會(huì)增強(qiáng)，不易成瘤。

可能是小鼠免疫排斥，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠

可以在接種后一周補(bǔ)種1次，可以很好的提高成功率

腫瘤長(zhǎng)起來(lái)后又消失的原因

很可能是由于炎癥反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收造成的。若后續(xù)腫瘤依舊未長(zhǎng)出來(lái)，可考慮更換免疫缺陷程度更大的小鼠。

血管生成

成管實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞 不能形成連續(xù)的網(wǎng)格

建議使用3-5代狀態(tài)較好且融合度70%-80%的HUVEC細(xì)胞

細(xì)胞數(shù)量過(guò)少會(huì)使細(xì)胞無(wú)法形成連續(xù)的網(wǎng)絡(luò)

4 - 18 h可見(jiàn)血管生成。建議每4個(gè)小時(shí)觀察一次。

侵襲實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞不轉(zhuǎn)移

細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力比較弱

細(xì)胞的活性太差，活性不好的細(xì)胞做侵襲實(shí)驗(yàn)難度較大

用胰酶消化后，必須將含血清的培養(yǎng)基洗去

類(lèi)器官實(shí)驗(yàn)

類(lèi)器官傳代的標(biāo)準(zhǔn)

不同類(lèi)器官時(shí)間不同，通常7-14日、直徑100-200um左右可以傳代，有些發(fā)育慢的可能要數(shù)周才能發(fā)育到適合傳代狀態(tài)。

鑒定類(lèi)器官的方法

最基礎(chǔ)的通過(guò)顯微鏡和H&E染色觀察類(lèi)器官形態(tài)；進(jìn)一步可以用免疫熒光檢測(cè)該類(lèi)器官是否表達(dá)相應(yīng)的biomarker；

為什么觀察到的形態(tài)卻和文獻(xiàn)不一致？

決定類(lèi)器官形態(tài)的因素有很多，樣本來(lái)源是否相同、選用的細(xì)胞因子品質(zhì)是否有差異都有可能改變最終的類(lèi)器官形態(tài)。