ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理，對待測抗體或者抗原進(jìn)行分析測定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數(shù)據(jù)處理。ELISA試劑盒標(biāo)本保存，在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中是非常重要的，ELISA實(shí)驗(yàn)在標(biāo)本保存時常出現(xiàn)溶血、凝集不全、受細(xì)菌污染等現(xiàn)象發(fā)生，下面詳細(xì):

一、標(biāo)本保存不當(dāng)

在冰箱中保存過久的標(biāo)本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性；標(biāo)本放置時間過長（如一天以上），有時抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾，ELISA測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。

二、標(biāo)本溶血

由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測定中，會導(dǎo)致非特異性顯色，ELISA試劑盒干擾測定結(jié)果。為克服上述干擾作用，標(biāo)本采集時必須注意避免溶血。

三、標(biāo)本凝集不全

在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開始凝固，18~24h全凝固。臨床檢驗(yàn)工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清，此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；這類情況于次日復(fù)查時因血凝已全，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮浴楸苊馍鲜龈蓴_作用，解決的辦法最好是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/span>

四、標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響

抗凝劑、酶抑制劑及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。

五、標(biāo)本受細(xì)菌污染

因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。

做好了ELISA試劑盒因素和操作因素之后，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性就容易的多了。