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食品標準更新速遞 | 食品中乳鐵蛋白的測定

來源：艾杰爾飛諾美 2025年07月18日 15:11

乳鐵蛋白（Lactoferrin, LF）是轉鐵蛋白家族中的一種鐵結合糖蛋白，乳鐵蛋白存在于人體的乳汁和各種分泌液中，在母乳中含量最高，初乳中含量非常高的核心免疫功能蛋白。它能與病原微生物競爭鐵源，抵御病原微生物侵襲，從而保護嬰幼兒免疫損傷。

1939年，科學家從牛奶中分離出紅色蛋白，但直到1961年人乳中的鐵結合蛋白才被提取，至此乳鐵蛋白才開始進入大眾視野。隨著研究的深入，科學家發現母乳和牛乳中的乳鐵蛋白具有相似的生物活性，氨基酸序列同源性達到69%，但是牛乳中乳鐵蛋白含量卻顯著低于母乳。隨著生物科技的進步，全球乳企開始研發加速，將被譽為“免疫乳黃金”的乳鐵蛋白應用于嬰幼兒配方奶粉中，為嬰兒的成長保駕護航。

乳鐵蛋白卡通圖片

GB5009.299-2024 食品安全國家標準食品中乳鐵蛋白的測定中明確規定了乳鐵蛋白項目檢測的基質，原理，前處理和分析耗材細節等。艾杰爾飛諾美 MDS實驗室依據該標準，提供了完整的實驗室檢測方案。

前處理方法

?稱量：稱取5g（精確至0.01g）試樣于燒杯中，加標

?提取：加入適量磷酸鹽緩沖液Ⅱ提取，分次將樣品轉移至 25mL 容量瓶，用磷酸鹽緩沖液Ⅱ 定容至刻度，充分混勻后轉入離心管，在4 ℃條件下 10000r/min 離心 8min，取樣液 10mL 待凈化；

?活化：肝素親和柱使用前先將柱中保護液放掉，后加入 5.0mL 磷酸鹽緩沖液Ⅱ活化；

?上樣：準確將 10.0mL樣液過柱，控制流速在 1mL/min~3mL/min；

?淋洗：用 10.0mL 磷酸鹽緩沖液Ⅱ淋洗，棄去流出液，用吸水紙擦拭干凈柱管內壁殘留液體；

?洗脫：5.0mL磷酸鹽緩沖液Ⅰ洗脫，不要抽干；

?濃縮：收集洗脫液并用磷酸鹽緩沖液Ⅰ定容至 5.00mL，過0.45μm PES水相針頭濾膜，上機待測。

色譜條件

?色譜柱：Jupiter C4 4.6×250mm 5µm 300?（00G-4167-E0）

?流動相：A：0.1%三氟乙-酸水溶液；B：乙腈；

?流速：1.0 mL/min；

?柱溫：30 ℃；

?進樣量：50 μL；

?梯度程序見下表：

注意：

• 肝素親和柱使用前要恢復至室溫（25℃）。

• 在吸取帶凈化液時不要吸取上層脂質及下層沉淀，以免過柱時堵塞小柱。

• 標準用鹽為無水磷酸氫二鈉，水合鹽用量需要進行換算。

實驗結果

牛乳鐵蛋白標準曲線

牛乳鐵蛋白標曲圖

牛乳鐵蛋白加標回收實驗結果

牛乳鐵蛋白標準品圖（20μg/mL）

巴氏殺菌乳基質牛乳鐵蛋白圖（20μg/mL）

實驗結論

本實驗重現了GB5009.299-2024 食品安全國家標準食品中乳鐵蛋白的測定，使用肝素親和柱結合液相色譜的檢測方法對巴氏殺菌乳（巴氏奶）基質進行了乳鐵蛋白的測試。樣品經磷酸鹽緩沖液Ⅱ提取后，肝素親和柱（12mL，柱容量≥2mg；貨號：PNBAC50020-12）凈化，Jupiter C4,4.6×250mm 5μm 300? (00G-4167-E0)液相色譜柱進行檢測，采用外標法定量。結果表明，添加水平的相對回收率為96.95%，RSD1.5%，能夠滿足檢測要求。

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