盤點(diǎn)探針與qPCR儀之間的“默契密碼”

    在PCR實(shí)驗(yàn)中，探針是一種關(guān)鍵的工具，用于增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的特異性和靈敏度，因此探針在檢測(cè)中被廣泛地使用。

探針是一段與目標(biāo)DNA或RNA序列互補(bǔ)的寡核苷酸，通常包含一個(gè)熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅基團(tuán)。在PCR反應(yīng)中起到特異性識(shí)別和信號(hào)放大的作用。在PCR擴(kuò)增過程中，探針與目標(biāo)DNA或RNA結(jié)合，當(dāng)PCR酶(如Taq酶)在延伸階段切割探針時(shí)，釋放出熒光基團(tuán)，從而允許熒光檢測(cè)器檢測(cè)到熒光信號(hào)。

       探針種類眾多，有TaqMan探針、分子信標(biāo)、雙雜交探針、小凹槽結(jié)合劑(MGB)探針、蝎形探針、LUX探針等，均依賴于某種形式的共價(jià)連接的熒光淬滅基團(tuán)分子，該分子在特定目標(biāo)序列存在時(shí)被釋放。

     探針如何適配PCR儀：

     一、明確熒光基團(tuán)

  首先，您需要明確所使用的探針對(duì)應(yīng)的熒光基團(tuán)。不同類型的探針會(huì)使用不同的熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)這些信息通常可以在探針供應(yīng)商提供的產(chǎn)品說明書中找到，確認(rèn)其激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的大致范圍。以下是一些常用的熒光基團(tuán)及其對(duì)應(yīng)的激發(fā)波長(zhǎng)(Ex)和發(fā)射波長(zhǎng)(Em)

     二、對(duì)比qPCR儀濾光片

若不在表1的范圍內(nèi)，理論上，只要探針?biāo)褂玫臒晒饣鶊F(tuán)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)跟儀器的濾光片的設(shè)置相配即可，就是只要最終熒光信號(hào)在儀器的檢測(cè)范圍內(nèi)，結(jié)果都可以被檢出。