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Invitrogen Q32880 Qubit microRNA Assay Kit：精準(zhǔn)定量 miRNA 的有力工具
特異性熒光染料結(jié)合：試劑盒采用了對(duì) miRNA 具有高度選擇性的熒光染料 。這種熒光染料僅在與 miRNA 結(jié)合時(shí)，才會(huì)發(fā)出強(qiáng)烈的熒光信號(hào)，而與核糖體 RNA（rRNA）或較大的信使 RNA（mRNA，>1000 bp）等幾乎不發(fā)生作用。當(dāng)熒光染料與 miRNA 結(jié)合后，其熒光性質(zhì)會(huì)發(fā)生顯著改變，熒光強(qiáng)度大幅增強(qiáng)，從而能夠準(zhǔn)確報(bào)告樣本中 miRNA 的濃度。即使樣本中 miRNA 豐度極低，也能產(chǎn)生可被精確檢測的信號(hào)，確保了對(duì) miRNA 定量的準(zhǔn)確性和特異性。
基于標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法：使用試劑盒時(shí)，首先利用提供的稀釋緩沖液對(duì)濃縮分析試劑進(jìn)行稀釋，然后加入樣本（可接受 1µL 到 20µL 間的任意體積） 。將樣本與稀釋后的試劑混合均勻后，放入 Qubit 熒光計(jì)中。Qubit 熒光計(jì)會(huì)讀取樣本的熒光信號(hào)強(qiáng)度，并將其與試劑盒內(nèi)預(yù)稀釋 miRNA 標(biāo)準(zhǔn)品建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)。通過這種方式，能夠精準(zhǔn)計(jì)算出樣本中 miRNA 的濃度。整個(gè)過程操作簡便，通常僅需較短時(shí)間即可完成，大大提高了實(shí)驗(yàn)效率。
出色的污染物耐受性：在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中，RNA 樣本常受到各種污染物的干擾，這些污染物可能會(huì)影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性 。Qubit microRNA Assay Kit 對(duì)常見污染物具有出色的耐受性，即使樣本中存在鹽、游離核苷酸、溶劑、洗滌劑或蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，也基本不會(huì)對(duì) miRNA 定量結(jié)果造成明顯影響。這一特性使得在處理復(fù)雜樣本時(shí)，如從細(xì)胞裂解物、血清、組織勻漿等來源提取的 RNA 樣本，能夠可靠地獲得 miRNA 的濃度數(shù)據(jù)，為科研人員提供了極大的便利。
高靈敏度：該試劑盒能夠準(zhǔn)確檢測到低至 0.5 ng 的 miRNA（在檢測管中） ，在低豐度 miRNA 樣本定量方面表現(xiàn)。許多生物學(xué)過程中，miRNA 的表達(dá)水平較低，傳統(tǒng)的定量方法可能無法準(zhǔn)確檢測。而 Qubit microRNA Assay Kit 憑借其高靈敏度，能夠有效檢測這些微量的 miRNA，為深入研究 miRNA 在生理和病理狀態(tài)下的功能變化提供了可能。例如在研究早期腫瘤發(fā)生過程中，一些關(guān)鍵 miRNA 的表達(dá)量變化極為細(xì)微，使用該試劑盒能夠精準(zhǔn)捕捉到這些變化，為腫瘤早期診斷標(biāo)志物的篩選提供依據(jù)。
寬動(dòng)態(tài)檢測范圍：試劑盒的核心動(dòng)態(tài)檢測范圍為 5 – 500 ng/mL ，能夠?qū)Τ跏?miRNA 樣本濃度在 50 ng/mL 到 100 µg/mL 間的樣品進(jìn)行準(zhǔn)確測定。這一寬動(dòng)態(tài)范圍使得它適用于多種類型的樣本和實(shí)驗(yàn)需求。無論是表達(dá)量較低的稀有 miRNA，還是表達(dá)量較高的常見 miRNA，都能在該試劑盒的檢測范圍內(nèi)獲得準(zhǔn)確的定量結(jié)果。在研究不同組織或細(xì)胞類型中 miRNA 的表達(dá)差異時(shí)，其寬動(dòng)態(tài)檢測范圍能夠滿足對(duì)不同豐度 miRNA 的檢測要求，全面揭示 miRNA 的表達(dá)譜特征。
高選擇性：試劑盒中的熒光染料對(duì) miRNA 相對(duì)于 rRNA 或大 mRNA 具有高度選擇性 。在復(fù)雜的 RNA 樣本中，rRNA 和大 mRNA 的含量往往遠(yuǎn)高于 miRNA，如果定量方法選擇性不佳，很容易受到這些大量 RNA 的干擾，導(dǎo)致 miRNA 定量不準(zhǔn)確。Qubit microRNA Assay Kit 能夠有效排除 rRNA 和大 mRNA 的干擾，準(zhǔn)確檢測出 miRNA 的含量，為 miRNA 的精準(zhǔn)定量提供了保障。在進(jìn)行 miRNA 表達(dá)譜分析、miRNA 與疾病關(guān)聯(lián)研究等實(shí)驗(yàn)中，高選擇性確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，避免了因其他 RNA 干擾而產(chǎn)生的誤判。
基礎(chǔ)生物學(xué)研究：在基礎(chǔ)生物學(xué)研究中，miRNA 參與了眾多重要的生物學(xué)過程，如細(xì)胞增殖、分化、凋亡等 。Qubit microRNA Assay Kit 可用于準(zhǔn)確測定不同細(xì)胞類型、組織或發(fā)育階段中 miRNA 的含量，為研究 miRNA 的生物學(xué)功能和作用機(jī)制提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)支持。例如在研究胚胎發(fā)育過程中，通過該試劑盒對(duì)不同發(fā)育時(shí)期胚胎細(xì)胞中 miRNA 的定量分析，有助于揭示 miRNA 在胚胎發(fā)育過程中的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，深入了解胚胎發(fā)育的分子機(jī)制。
疾病診斷與研究：miRNA 在多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，其表達(dá)水平的異常變化與疾病的診斷、預(yù)后和治療密切相關(guān) 。在腫瘤研究領(lǐng)域，許多 miRNA 被發(fā)現(xiàn)可作為腫瘤標(biāo)志物用于腫瘤的早期診斷和預(yù)后評(píng)估。Qubit microRNA Assay Kit 能夠準(zhǔn)確檢測腫瘤組織或體液（如血液、尿液等）中 miRNA 的含量，為腫瘤的早期診斷、病情監(jiān)測以及藥物療效評(píng)估提供有力工具。此外，在心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等其他疾病研究中，該試劑盒也可用于探索 miRNA 與疾病的關(guān)聯(lián)，為疾病的發(fā)病機(jī)制研究和治療靶點(diǎn)的篩選提供依據(jù)。
藥物研發(fā)：在藥物研發(fā)過程中，了解藥物對(duì) miRNA 表達(dá)的影響以及 miRNA 作為潛在藥物靶點(diǎn)的作用至關(guān)重要 。Qubit microRNA Assay Kit 可用于檢測藥物處理后細(xì)胞或動(dòng)物模型中 miRNA 的表達(dá)變化，評(píng)估藥物的療效和安全性。同時(shí)，通過對(duì) miRNA 與藥物相互作用機(jī)制的研究，有助于發(fā)現(xiàn)新的藥物靶點(diǎn)，為開發(fā)更有效的治療藥物提供支持。例如在開發(fā)針對(duì)特定疾病的 miRNA 模擬物或抑制劑時(shí)，使用該試劑盒能夠準(zhǔn)確監(jiān)測藥物對(duì)目標(biāo) miRNA 的調(diào)控效果，優(yōu)化藥物研發(fā)流程。
樣本要求：試劑盒適用于多種來源的 RNA 樣本，包括細(xì)胞裂解物、組織勻漿、血清、血漿、唾液等 。但為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，樣本應(yīng)盡可能保持完整，避免 RNA 降解。在樣本采集和處理過程中，需嚴(yán)格遵循相關(guān)操作規(guī)程，使用無 RNase 的耗材和試劑。若樣本中存在可能影響 miRNA 定量的雜質(zhì)，如過多的蛋白質(zhì)、多糖等，建議在使用試劑盒前進(jìn)行適當(dāng)?shù)募兓幚怼４送猓捎?miRNA 在樣本中的含量通常較低，應(yīng)注意樣本的保存條件，盡量避免反復(fù)凍融，以防止 miRNA 降解導(dǎo)致定量不準(zhǔn)確。
實(shí)驗(yàn)操作流程：使用 Qubit microRNA Assay Kit 進(jìn)行 miRNA 定量的操作流程相對(duì)簡便 。首先，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，使用試劑盒提供的稀釋緩沖液將濃縮分析試劑稀釋成工作液。接著，取適量（1µL 到 20µL）的 RNA 樣本加入到稀釋好的工作液中，充分混合均勻。將混合后的樣品放入 Qubit 熒光計(jì)中，按照儀器操作指南啟動(dòng)檢測程序，熒光計(jì)會(huì)自動(dòng)讀取熒光信號(hào)并計(jì)算出 miRNA 濃度。整個(gè)操作過程需在室溫下進(jìn)行，且要注意避免樣品受到光照、污染等因素的影響。在操作過程中，應(yīng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書的要求進(jìn)行，確保每個(gè)步驟的準(zhǔn)確性和一致性，以獲得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
存儲(chǔ)條件：為保證試劑盒的性能穩(wěn)定，Qubit microRNA Assay Kit 應(yīng)存儲(chǔ)于 2 - 8°C 的環(huán)境中 。在使用過程中，要盡量減少試劑盒的反復(fù)凍融次數(shù)，取用試劑后應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。同時(shí)，要注意試劑盒的有效期，在有效期內(nèi)使用，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。此外，對(duì)于試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品和工作液，也應(yīng)按照說明書的要求進(jìn)行保存和使用，避免因保存不當(dāng)導(dǎo)致試劑失效或濃度不準(zhǔn)確，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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