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上新 | 翌圣酵母表達DNase l，告別RNA提取中的DNA污染困擾！
在基因表達分析領域，基因組DNA污染可謂RNA定量過程中的“隱形殺手”。即便RNA樣本中僅存在微量的基因組DNA殘留，也極有可能使qPCR的檢測結果產生顯著偏差。因此，如何消除RNA樣本中的基因組DNA干擾，同時又不影響RNA定量的準確性，一直是科研人員面臨的重大技術難題。
DNase I（脫氧核糖核酸酶 I）作為解決這一難題的黃金標準，憑借的雙鏈/單鏈DNA消化能力，在RNA研究中發揮著關鍵作用。
DNase I簡介
DNase I是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA的非特異性核酸內切酶。它能夠水解磷酸二酯鍵，產生含有5'-磷酸基團和3'-OH基團的單脫氧核苷酸和寡脫氧核苷酸。DNase I最佳的工作pH范圍是7-8，其活性依賴于Ca2+，并可被二價金屬離子如Mn2+，Mg2+，Zn2+等激活。在Mg2+存在條件下，DNase I 隨機剪切雙鏈DNA的任意位點；Mn2+存在條件下，DNase I可在同一位點剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個核苷酸突出的粘末端。
圖1. DNase I在Mg2+以及Mn2+存在下可切割dsDNA原理圖
傳統DNase I技術正面臨難以突破的困境：牛胰提取法因原料來源復雜，RNase殘留問題突出，純化過程不僅繁瑣，且難以保證產品均一性；大腸桿菌表達系統則受制于生物合成機制，面臨產量天花板問題。
翌圣生物直擊行業痛點，重磅推出酵母表達Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549/14550)，依托真核表達系統的優勢，實現兩大核心技術突破：
產能突破：運用真核分泌表達技術，有效避免胞內毒素積累，同時搭配高密度發酵工藝，多方位提升產能，滿足大規模生產需求；
性能升級：得益于酵母體系天然的糖基化修飾，賦予酶更穩定的空間結構，即使在復雜樣本環境中，依然能夠高效地消化DNA。
數據展示
Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549/14550)
消化活性，媲美進口品質
分別使用不同投入量的翌圣及進口品牌Supplier A的DNase I對1 μg質粒DNA進行消化處理，結果顯示翌圣14549ES對質粒DNA去除效率媲美Supplier A。
圖2.質粒DNA去除效果驗證
無RNase殘留
取10 U翌圣生物Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549)與RNA底物于37℃孵育1 h，經瓊脂糖凝膠電泳分析顯示，三個批次的該酶制劑均未檢出RNase活性殘留，消除RNA樣本降解風險，為對純度要求的RNA分析場景提供可靠保障。
圖3.RNase殘留結果驗證
RNA提取應用驗證
為評估翌圣生物Recombinant DNase I (RNase-free, Yeast) (Cat#14549)在RNA提取中的應用效果，取20 U該酶制劑處理12例不同來源的小鼠肝臟前處理樣本。經后續RNA提取及瓊脂糖凝膠電泳分析證實，該酶處理組RNA完整性良好，表明此DNase I在有效消化DNA的同時，不會對RNA質量產生影響，滿足RNA提取實驗的技術要求。
圖4.RNA提取應用驗證
翌圣DNase I 選擇指南
Description | Catalog No. | Application |
提取自牛胰腺，經色譜工藝制備，核糖核酸酶A（RNase A）活性含量極低。為凍干粉劑。 | 10607ES | 1、從樣本中提取RNA時去除gDNA。（如果是微量樣本，需要用重組來源的DNase I）。 2、蛋白質研究: 從蛋白制備物中去除DNA。 |
提取自牛胰腺，經色譜工藝制備，核糖核酸酶A（RNase A）活性含量極低（≤0.0005%）。為凍干粉劑。 | 10608ES | |
大腸桿菌重組表達DNase I (RNase-free)，大腸桿菌重組表達，不含RNase，液體形式。 | 10325ES | 適用于各種應用：RNA提取過程中的基因組DNA去除、反轉錄前的基因組DNA清除、體外轉錄后模板DNA的消化、RNA建庫過程中rRNA去除、缺口平移法進行DNA標記、DNase I足跡法分析實驗、需要避免動物源成分的應用場景等。 |
畢赤酵母重組表達DNase I (RNase-free)，不含RNase，液體形式。 | 14549ES | |
14550ES | ||
大腸桿菌重組表達DNase I (RNase-free)，GMP-grade，液體形式。 | 10611ES | GMP藥用級別。用于采用藥用規格原輔料生產，符合GMP規范的產品生產與質量管理規程保障生產過程及所有原輔料可追溯。 |
參考文獻
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