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凝膠滲透色譜基于分子尺寸差異進(jìn)行分離。色譜柱中填充多孔性凝膠顆粒，這些顆粒具有特定孔徑范圍。當(dāng)樣品溶液流經(jīng)色譜柱時(shí)，較大尺寸的分子無(wú)法進(jìn)入凝膠孔隙，只能沿著凝膠顆粒間的空隙快速通過(guò)色譜柱，在柱中停留時(shí)間較短；而較小尺寸的分子能夠進(jìn)入凝膠孔隙內(nèi)部，其流動(dòng)路徑變長(zhǎng)，在柱中停留時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，從而實(shí)現(xiàn)不同大小分子的分離。
常用的凝膠有交聯(lián)聚苯乙烯凝膠等。以交聯(lián)聚苯乙烯凝膠為例，其具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性，能在多種有機(jī)溶劑中使用，并且具有合適的孔徑分布，可實(shí)現(xiàn)對(duì)不同分子量范圍聚合物的有效分離。凝膠的孔徑大小決定了可進(jìn)入凝膠內(nèi)部的分子尺寸上限，通過(guò)選擇合適孔徑的凝膠，能夠針對(duì)性地分離特定分子量范圍的樣品。
凝膠滲透色譜儀操作步驟：
1.樣品準(zhǔn)備：將待分析的樣品溶解在合適的溶劑中，制備成一定濃度的溶液。溶劑的選擇需考慮樣品的溶解性以及與凝膠色譜柱的兼容性，常用的溶劑有四氫呋喃、氯仿等。樣品溶液需經(jīng)過(guò)過(guò)濾或離心等預(yù)處理步驟，以去除其中的雜質(zhì)和顆粒物，防止堵塞色譜柱。
2.色譜條件設(shè)置：根據(jù)樣品的性質(zhì)和分析要求，設(shè)置合適的流動(dòng)相流速、柱溫等色譜條件。一般來(lái)說(shuō)，較低的流速有利于提高分離效果，但會(huì)延長(zhǎng)分析時(shí)間；較高的柱溫可加快分子在凝膠中的擴(kuò)散速率，縮短分析時(shí)間，但可能會(huì)影響某些樣品的穩(wěn)定性和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3.進(jìn)樣分析：使用進(jìn)樣器將處理好的樣品溶液注入色譜柱中，啟動(dòng)輸液泵，使流動(dòng)相攜帶樣品在色譜柱中進(jìn)行分離。在分離過(guò)程中，檢測(cè)器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)并記錄樣品的濃度變化，得到色譜圖。
4.數(shù)據(jù)處理：對(duì)得到的色譜圖進(jìn)行分析處理，通過(guò)積分峰面積、測(cè)定保留時(shí)間等數(shù)據(jù)，結(jié)合已知標(biāo)準(zhǔn)樣品的數(shù)據(jù)或相關(guān)計(jì)算公式，可確定樣品的分子量分布、分子量平均值等信息。例如，根據(jù)色譜圖中不同峰對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間和已知標(biāo)準(zhǔn)曲線，可計(jì)算出各組分的分子量，進(jìn)而得到樣品的數(shù)均分子量、重均分子量等參數(shù)。
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