二手羅氏 LightCycler® 96 實時熒光定量PCR儀系統技術概述

一、引言

隨著分子診斷和基因研究需求的不斷增長，實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qPCR）技術在科研、臨床檢測、食品安全、生物制藥等領域得到了廣泛應用。PCR儀器作為該技術的核心設備，具有重要作用。在設備選型中，部分實驗室選擇使用二手儀器作為過渡或擴容方案，以控制成本并維持實驗效率。

羅氏（Roche）推出的 LightCycler® 96 是一款廣泛應用于科研和基礎檢測領域的中通量實時熒光定量PCR儀。其二手設備在功能結構、操作流程等方面基本保持完整，并在技術指標滿足要求的前提下，仍可繼續在標準實驗環境中發揮作用。本文將從儀器構造、功能特點、使用優勢、適用范圍、選購建議等方面，全面介紹二手 LightCycler® 96 實時熒光定量PCR系統。

二、設備概況

LightCycler® 96 是羅氏分子系統產品線中的一款96孔qPCR平臺，設計理念偏向通用性和穩定性，適用于中小規模實驗室的日常基因定量任務。該設備集成了精準溫控系統、四通道熒光檢測模塊以及數據分析平臺，可支持常見的SYBR Green、TaqMan探針等反應體系。

主要技術參數如下：

三、構造與工作原理

1. 溫控系統

設備采用雙向帕爾貼（Peltier）技術，通過閉環反饋控制，確保PCR反應過程中的溫度均一性與重現性。熱蓋系統自動壓緊，防止樣品蒸發，提升反應效率。

2. 熒光檢測模塊

光學系統具備四個獨立檢測通道，采用精密濾光片與光電探測器分光讀取熒光強度，可實時監控多重擴增反應的熒光信號，適用于雙通道或多通道實驗設計。

3. 控制與數據分析

配套 LightCycler® 96 軟件支持：

• 擴增曲線和熒光信號的實時可視化；

• Ct值自動判讀；

• 標準曲線法、ΔΔCt法、相對/絕對定量分析；

• 熔解曲線分析，判斷引物特異性。

四、二手設備使用價值分析

1. 經濟性

二手LightCycler® 96 儀器通常原價50%甚至更多，對于預算有限的實驗室是一種可行的擴展選擇。若由正規渠道回收、翻新并經校準檢測，設備仍可提供穩定的數據輸出。

2. 適用性

二手設備在功能模塊完整、光學系統正常、溫控系統穩定的前提下，可應用于以下任務：

• RNA逆轉錄后的基因表達定量；

• 病原體DNA/RNA的檢測；

• 突變篩查與多態性分析；

• 食品和水質中污染物的分子檢測；

• 藥物代謝基因分型研究。

3. 軟件兼容性

配套軟件無需訂閱費用，支持在主流Windows操作系統下運行，兼容xlsx、csv、txt等格式數據導出，便于進一步統計分析或整合到LIMS系統中。

五、二手設備選購與使用注意事項

1. 購買渠道與檢測報告

建議通過有資質的實驗設備供應商采購，要求提供設備來源、校準報告、檢測報告、功能測試記錄，以及操作說明書等完整資料。避免通過非正規途徑購入未經檢測的設備，存在數據不穩定或電氣故障等隱患。

2. 外觀與結構檢查

• 儀器應無明顯磕碰或變形；

• 內部托盤無銹蝕或污染；

• 光路模塊無損壞、無灰塵遮蔽；

• 顯示屏、端口、按鈕正常運行。

3. 功能測試建議

建議進行以下項目測試：

• 各通道熒光采集準確性；

• 溫度梯度測試（96孔溫控均勻性）；

• 實驗復現性測試（3次重復反應Ct值標準差≤0.2）；

• 軟件運行穩定性。

4. 易損件更換與保養

常見易損件包括熱蓋密封圈、光源模塊、風扇等。建議定期檢查并更換，以延長設備使用壽命。設備應在通風干燥環境中使用，避免強光、濕氣、高溫影響。

六、典型應用實例

1. 科研實驗室

某高校生命科學實驗室購入一臺二手LightCycler® 96用于課題組日常基因表達檢測。經過校準后，該設備可穩定運行，配合自制SYBR體系完成對植物轉基因株系的篩選與分析。

2. 醫院檢驗科

在病原體篩查方面，一些社區醫院通過采購二手qPCR設備構建初步檢測能力，對常見呼吸道病毒、HPV、人類皰疹病毒等進行初篩，隨后送樣至上級醫院進一步確診。

3. 食品企業質控實驗室

某食品企業為檢測成品中是否存在非法添加物質（如動物源成分、轉基因成分），購置了二手LightCycler® 96 配合商業試劑盒，開展日常抽檢和留樣復測。

七、常見問題與解決方案

八、發展趨勢與選型建議

隨著數字PCR、微流控PCR等新技術的發展，傳統qPCR平臺逐漸融合更多自動化與微型化元素。然而，在預算有限、應用任務穩定的實驗場景中，二手LightCycler® 96 仍具備實用價值。建議在以下情況下考慮采購：

• 實驗室為教學或科研用途，對通量要求不高；

• 僅用于標準化重復實驗，不涉及高通量篩查；

• 可配合已有反應體系與試劑平臺，形成閉環工作流程。

九、總結

二手羅氏 LightCycler® 96 實時熒光定量PCR儀作為一款技術成熟、操作簡便的中通量qPCR平臺，若維護得當，仍可在常規分子生物學研究及基礎檢測中發揮良好作用。對于實驗室預算有限、檢測需求明確的單位，合理選購并科學使用二手設備，是提升實驗效能、優化資源配置的一種現實路徑。