試用 | LAMP非特異性擴增克星來了!Tte UvrD Helicase讓結果更純凈
等溫擴增技術(Isothermal Amplification)是一種在恒定溫度下高效擴增特定核酸序列的分子生物學技術。與傳統PCR技術相比,該技術無需熱循環儀,僅需簡單的恒溫設備即可完成擴增反應,具有操作簡便、反應快速、靈敏度高等顯著優勢,這些特性使其在即時診斷領域展現出巨大的應用潛力。在眾多等溫擴增技術中,LAMP(環介導等溫擴增)技術因其高靈敏度和強特異性而成為主流選擇。然而,該技術也存在明顯局限:其依賴4-6條特異性引物和Bst DNA聚合酶的復雜反應體系,在實際應用中容易產生非特異性擴增,導致假陽性結果,嚴重制約了其在臨床診斷中的應用可靠性。
最新研究表明,引入Tte UvrD Helicase可有效突破這一技術瓶頸。Tte UvrD Helicase源自嗜熱菌Thermus thermophilus,熱穩定性強,具有的DNA解旋能力,可高效解開雙鏈DNA,適用于高復雜度模板的處理,顯著降低LAMP實驗中的非特異性擴增[1]。

圖1. Tte UvrD解旋酶在HDA擴增技術中的原理圖示意[2]
Tte UvrD Helicase在
LAMP反應中減少非特異擴增的原理
在LAMP反應中,高濃度引物(如FIP/BIP)容易形成引物二聚體或與非目標序列結合,導致非特異性擴增。Tte UvrD Helicase能夠主動解旋雙鏈DNA,包括由引物二聚體或非特異性退火形成的非目標結構,從而顯著減少因引物錯誤配對或模板二級結構引起的假陽性擴增,提高LAMP反應的特異性。
在此,我們向您推介翌圣生物全新研發的Tte UvrD Helicase(Cat#14572),該產品能在60–75℃高溫下保持高效活性,顯著提升等溫擴增技術的特異性和速度,避免非特異性擴增。該酶尤其適用于各種等溫擴增技術,如解旋酶依賴擴增(HDA)、環介導等溫擴增(LAMP)、重組酶聚合酶擴增(RPA)、滾環擴增(RCA)和鏈置換擴增(SDA)等。
新品,福利大放送!現開放5個免費試用名額,先到先得!只需掃描下方二維碼,聯系我們的專業工作人員,即可輕松申領試用產品,開啟高效科研之旅!

活動細則:
1、活動時間:即日起-5月31日;
2、活動名額有限,每位客戶限一套。
性能展示
翌圣Tte UvrD Helicase(Cat#14572)
LAMP體系中能有效消除非特異性
分別使用兩組LAMP引物配制LAMP反應體系,分別在每組體系中設置添加10 ng Tte UvrD Helicase實驗組和未添加Tte UvrD Helicase對照組,結果顯示翌圣Tte UvrD Helicase的引入能有效消除LAMP體系的非特異性擴增,且不影響陽性樣本的檢測。

無核酸外切酶、切口酶、RNase酶殘留
將20 ng Tte UvrD Helicase分別與核酸底物孵育,并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化。實驗結果表明,翌圣的3個批次Tte UvrD Helicase均未檢測出核酸外切酶、切口酶或RNase 殘留,為您的實驗結果準確性與可靠性保駕護航。

圖3. Tte UvrD Helicase核酸外切酶、切口酶、RNase殘留檢測結果
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參考文獻:
[1] Bokelmann L, Nickel O, Maricic T, et al. Point-of-care bulk testing for SARS-CoV-2 by combining hybridization capture with improved colorimetric LAMP[J]. Nature Communications, 2021, 12(1): 1467.
[2] Barreda-García S, Miranda-Castro R, de-Los-Santos-álvarez N, et al. Helicase-dependent isothermal amplification: a novel tool in the development of molecular-based analytical systems for rapid pathogen detection[J]. Analytical and bioanalytical chemistry, 2018, 410: 679-693.
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