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戴安高效液相色譜儀（HPLC）作為分析化學(xué)領(lǐng)域核心設(shè)備，其操作流程的規(guī)范性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本文基于設(shè)備結(jié)構(gòu)特性，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐，系統(tǒng)梳理其標(biāo)準(zhǔn)化操作流程。
一、開機(jī)準(zhǔn)備與參數(shù)設(shè)置：
開機(jī)前需檢查環(huán)境條件（溫度10-40℃，濕度10%-85%），確認(rèn)電源電壓穩(wěn)定。啟動(dòng)儀器后，通過控制面板設(shè)置流動(dòng)相比例、流速（如0.5-2.0 mL/min）及柱溫（如30-40℃）。例如，分析藥物成分時(shí)，采用等度洗脫模式，將甲醇-水（70:30）作為流動(dòng)相，流速設(shè)為1.0 mL/min，可實(shí)現(xiàn)有效分離。檢測器參數(shù)設(shè)置需匹配分析需求，如紫外檢測器需選擇254 nm波長，帶寬設(shè)為1 nm。
二、樣品前處理與進(jìn)樣：
樣品需根據(jù)性質(zhì)選擇前處理方法：固體樣品需用甲醇或乙腈溶解，液體樣品需用0.45 μm濾膜過濾。進(jìn)樣前需檢查進(jìn)樣器狀態(tài)，自動(dòng)進(jìn)樣器需確認(rèn)洗針液（50%甲醇）充足，手動(dòng)進(jìn)樣則需確保注射器無氣泡。進(jìn)樣量需控制在色譜柱容量范圍內(nèi)（如4.6 mm×250 mm色譜柱建議進(jìn)樣量<20 μL）。例如，在環(huán)境水樣分析中，通過固相萃取富集后，將樣品稀釋至100倍并過濾，確保進(jìn)樣量精確至10 μL。
三、運(yùn)行分析與數(shù)據(jù)處理：
啟動(dòng)分析后，需等待基線穩(wěn)定（通常需10-30分鐘），期間可進(jìn)行質(zhì)控樣測試。數(shù)據(jù)采集時(shí)，需監(jiān)控壓力變化（正常范圍50-400 bar），若壓力異常需立即停機(jī)檢查。分析完成后，采用外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量，例如通過建立標(biāo)準(zhǔn)曲線（R2>0.995），可實(shí)現(xiàn)ng/mL級定量分析。某實(shí)驗(yàn)室在分析食品添加劑時(shí)，通過優(yōu)化流動(dòng)相梯度，將檢測限降低至0.5 ng/mL。
四、關(guān)機(jī)與維護(hù)：
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，需用純有機(jī)溶劑（如甲醇）沖洗色譜柱30分鐘，再關(guān)閉檢測器電源。長期停機(jī)時(shí)，需用80%甲醇水溶液保存色譜柱，并定期進(jìn)行系統(tǒng)壓力測試。日常維護(hù)包括每周更換清洗液、每月清洗進(jìn)樣針，以及每季度更換在線過濾器。例如，某實(shí)驗(yàn)室通過嚴(yán)格執(zhí)行維護(hù)規(guī)程，將色譜柱使用壽命延長至12個(gè)月以上。
戴安高效液相色譜的操作需遵循“準(zhǔn)備-運(yùn)行-維護(hù)”閉環(huán)管理，通過精細(xì)化參數(shù)設(shè)置和標(biāo)準(zhǔn)化流程控制，可確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性和儀器運(yùn)行的穩(wěn)定性，為科研和質(zhì)量控制提供堅(jiān)實(shí)保障。
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