區分活細胞和死細胞是在研究細胞生長調控機制以及細胞死亡機制和途徑時常見且非常重要的任務。  

AkrivisBio的即用型試劑讓這一過程變得簡單。我們結合了一種專有的細胞可滲透的綠色熒光染料來染色活細胞，以及一種紅色非滲透性染料——碘化丙啶（propidium iodide），用于染色所有細胞。染色后的細胞可以通過熒光顯微鏡進行觀察。試劑盒提供了足夠用于4片24孔板的材料。

艾美捷活細胞與死細胞區分染色試劑盒：

貨號：COS-0103

規格：包含用于染色4片24孔板的試劑。

樣本類型：貼壁細胞或懸浮細胞

適用物種：所有

檢測方法：熒光顯微鏡

檢測類型：定性檢測

應用：用于對活細胞進行染色，以便在熒光顯微鏡下方便地區分活細胞和死細胞。

儲存條件：-20°C

運輸溫度：冰凝膠包運輸

保質期：自發貨之日起一年

活細胞與死細胞區分染色試劑盒成分：

-活細胞染料：50微升，綠色（COS-0103-A）  

-全細胞染料：50微升，紅色（碘化丙啶，COS-0103-B）  

-染色緩沖液：50毫升（COS-0103-C）  

儲存和穩定性：

未開封的試劑盒應儲存于-20°C。染色緩沖液和全細胞染料（碘化丙啶）開封后可在4°C下儲存。活細胞染料應始終儲存于-20°C。

染色步驟：

1. 根據要染色的孔數準備足夠的染色液。每個孔需要0.5微升活細胞染料、0.5微升全細胞染料和0.5毫升染色緩沖液。根據實驗規模相應調整體積。  

2. 通過輕柔離心（500×g，5分鐘）收集細胞（10?個）。移除并丟棄上清液。  

3. 加入500微升染色液，輕輕重懸細胞沉淀。  

4. 在37°C下孵育15分鐘。  

5. 將細胞懸液轉移到載玻片上，并用蓋玻片覆蓋細胞懸液。放置在顯微鏡載物臺上進行觀察。  

注意：對于貼壁細胞，可以直接在蓋玻片上培養。染色時，傾斜并移除培養基，然后放平，加入0.5毫升染色液并孵育15分鐘。將蓋玻片倒置在載玻片上，放置在顯微鏡載物臺上。  

6. 使用能夠檢測熒光素和羅丹明的帶通濾光片（排除較短波長）的熒光顯微鏡立即觀察細胞。  

-活細胞會被細胞可滲透的活細胞染料染成綠色熒光（激發波長488納米；發射波長518納米）。  

-死細胞染料會將活細胞和死細胞都染成紅色（激發波長488納米；發射波長615納米），從而呈現出黃色-紅色的混合外觀。  

注意：不同細胞類型的染色條件有所不同，因此需要手動調整條件以找到兩種染料的合適濃度。碘化丙啶是一種疑似致癌物，操作時需格外小心。