• 擴增曲線 (Amplification Curve)：評估反應效率的重要工具，確保實驗結果的科學性和可靠性。

• Ct 值 (Cycle Threshold)：反應樣品中靶標 DNA 的初始量，Ct 值越小，說明樣品中靶標 DNA 的初始量越多。

• 熔解曲線 (Melting Curve)：驗證特異性的小助手，判斷是否有非特異擴增或引物二聚體。

Section.02

擴增曲線:

揭示 PCR 反應的動態過程

擴增曲線 (Amplification curve) 是指隨 PCR 反應進行，根據熒光信號強度隨著循環數變化而繪制的曲線。

Section.03

Ct 值: 解鎖你的定量密碼

Ct 值，全稱為 Cycle Threshold，即在 PCR 反應中，每個反應管內的熒光信號達到設定的閾值時所經歷的循環數。

簡單來說，Ct 值指在 PCR 反應中的熒光信號突破了“背景噪音”，開始呈指數級上升時，對應的那個“拐點”所處的循環次數，它告訴我們“什么時候開始有戲了”。總結一句話，Ct 值就像是 PCR 實驗中的“開場白”，它告訴你“什么時候開始精彩”！

Ct 值和起始模板量之間的關系就像參加跑步比賽，起跑線距離終點的遠近決定了跨越終點的時間。簡單來說，起始模板量越多，PCR 反應越快，Ct 值就越小；而起始模板量越少，反應就會慢一些，Ct 值自然就會更大。

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熔解曲線:

一眼看穿“真假擴增”

通過逐步提高溫度同時監測每個溫度點的熒光信號變化，最終生成一條“熔解曲線” (Melting Curve)。隨著溫度上升，DNA 雙鏈結構開始解開，熒光信號從雙鏈中釋放出來，熒光信號下降，最終升高到 DNA 雙鏈解開 50% 的溫度即為溶解溫度 (Tm)，是 DNA 解鎖的關鍵溫度。

熔解曲線聽起來像是 DNA 在做一場高溫的“脫單”大典！它揭示了隨著溫度升高，DNA 雙螺旋結構逐漸分開變成“單鏈情人”的過程，用于分析 PCR 產物的濃度、特點及純度。

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小結

qPCR 實驗中，Ct 值幫你量化基因表達，熔解曲線幫你驗證特異性。強強聯合堪稱 qPCR 實驗成功的“黃金搭檔”。所以，下次當你看到漂亮的 Ct 值和干凈的熔解曲線時，不妨給自己點個贊！

關注我們，帶你玩轉分子生物學的每一個細節，實驗成功就是這么簡單！歡迎留言分享，讓我們一起成為 qPCR 實驗的高手。

[1] Grace Adams. A beginner’s guide to RT-PCR, qPCR and RT-qPCR. Biochem (Lond) 22 June 2020; 42 (3): 48–53.