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D-Lin-MC3-DMA

MCE 國際站：D-Lin-MC3-DMA

品牌：MedChemExpress (MCE)

CAS：1224606-06-7

純度：0.9968

貨號：HY-112251

存儲條件：-20°C, 避光 *溶劑中：-80°C, 6 個月; -20°C, 1 個月（避光）

運輸條件：美國大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產品活性：D-Lin-MC3-DMA 是一種可電離的陽離子脂質, 是一種有效的遞送 siRNA 載體。

體外：MC3 脂質納米粒的制備 這里我們提供了 FDA 批準的 Patisiran（一種靶向轉甲狀腺素蛋白 (TTR) mRNA 的 siRNA）中 LNPs 的脂質摩爾比。此配方中脂質的摩爾比為 D-Lin-MC3-DMA: DSPC: 膽固醇: PEG2000-C-DMG = 50:10:38.5:1.5[1]，RNA 與脂質的重量比為 0.05 (wt/wt)。 A. 脂質混合物制備 1. 將脂質溶解在乙醇中并制備10 mg/m 儲備溶液。脂質儲備溶液可儲存在-20°C 下以備后用。 注 1：可離子化脂質通常是液體。由于其粘度，應始終稱重，而不能依賴自動移液器的體積。注 2：膽固醇溶液應保持溫度（>37℃）以保持流動性。及時轉移膽固醇溶液以避免冷卻。2. 按照說明制備脂質混合物溶液。每毫升脂質混合物添加以下物質：548 μL 10 mg/mL D-Lin-MC3-DMA（HY-112251）、254 μL 10 mg/mL 膽固醇（HY-N0322）、134 μL 10 mg/mL DSPC（HY-W040193）和 64 μL PEG2000-C-DMG（HY-145411）[2]。充分混合溶液以獲得澄清溶液。該混合物含有 10 mg 總脂質。注 3：脂質的選擇和比例可以根據(jù)需要改變，這將影響 LNP 特性（大小、多分散性和功效）和所需的 mRNA 量。 B. siRNA 制備 1. 用 100 mM pH 5 醋酸鈉緩沖液制備 166.7 μg/mL siRNA 溶液。 注 4：脂質：siRNA 重量比影響包封效率。其他重量比可作為替代配方制備，用戶應相應調整。 C. 混合 有三種常用的方法可以實現(xiàn)溶液的快速混合：移液器混合法、渦旋混合法和微流體混合法。所有這些混合方法都可以用于各種應用。值得注意的是，移液器混合法和渦旋混合法可能產生更不均勻的 LNP，包封效率更低，并且容易發(fā)生變化。微流體裝置能夠以高度可控、可重復的方式進行快速混合，從而實現(xiàn)均勻的 LNP 和高包封效率。在這些裝置中，乙醇脂質混合物和水溶液在單獨的流中快速混合。兩股液流混合后形成 LNP，然后將其收集至單個收集管中。1. 移液器混合法：1.1. 移液器吸取 3 mL siRNA 溶液并快速將其添加到 1 mL 脂質混合溶液中（通常使用 1:3 的乙醇脂質混合物與水性緩沖液的比例。）快速上下移液 20-30 秒。1.2. 將所得溶液在室溫下孵育長達 15 分鐘。1.3. 混合后，將 LNP 在 PBS（pH 7.4）中透析 2 小時，使用 0.2 μm 過濾器進行無菌過濾，并在 4°C 下保存。2. 渦旋混合法：1.1. 在渦旋混合器上以中速渦旋 3 mL siRNA 溶液。然后， 快速將 1 mL 脂質混合溶液加入到渦旋溶液中（通常使用 1:3 的乙醇脂質混合物和水性緩沖液的比例）。繼續(xù)渦旋所得分散體 20-30 秒。1.2. 將所得溶液在室溫下孵育長達 15 分鐘。1.3. 混合后，將 LNPs 對 PBS（pH 7.4）透析 2 小時，使用 0.2 μm 過濾器進行無菌過濾，并在 4°C 下儲存。3. 微流體混合方法：1.1 將 3 mL siRNA 緩沖液和 1 mL 脂質混合物溶液以 12 ?mL/min 的總流速在微流體裝置中混合（通常使用 1:3 的乙醇脂質混合物和水性緩沖液的比例）。注 5：可以改變流速比和總流速等參數(shù)來微調 LNPs。1.2混合后，將 LNPs 用 PBS（pH 7.4）透析 2 小時，使用 0.2 μm 過濾器進行無菌過濾，并在 4°C 下儲存。參考文獻 1. Curr Issues Mol Biol. 2022 年 10 月 19 日；44(10):5013-5027。2. Curr Protoc. 2023；3(9):e898。MCE 尚未獨立證實這些方法的準確性。它們僅供參考。

體內：含有二硬脂酰磷脂酰膽堿 (DSPC) 和可電離氨基脂質（如二亞油基甲基-4-二甲氨基丁酸酯 (DLin-MC3-DMA)）的脂質納米顆粒 (LNP) 是體內有效的 siRNA 遞送載體。LNP-siRNA 系統(tǒng)經(jīng)過優(yōu)化，可在小鼠靜脈注射后在肝細胞中實現(xiàn)最大的基因沉默效力，其中包含 DLin-MC3-DMA (MC3)、DSPC、膽固醇和聚乙二醇 (PEG)-脂質，摩爾比為 50/10/38.5/1.5。DLin-MC3-DMA 表現(xiàn)出優(yōu)化的 pKa 值，可顯著提高效力[1]。MCE 尚未獨立證實這些方法的準確性。它們僅供參考。

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參考文獻：

[1]. Kulkarni JA, et al. Design of lipid nanoparticles for in vitro and in vivo delivery of plasmid DNA. Nanomedicine. 2017 May;13(4):1377-1387.

[2]. Ferraresso F, Strilchuk AW, Juang LJ, Poole LG, Luyendyk JP, Kastrup CJ. Comparison of DLin-MC3-DMA and ALC-0315 for siRNA Delivery to Hepatocytes and Hepatic Stellate Cells. Mol Pharm. 2022;19(7):2175-2182.