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雙縮脲法蛋白質含量測定試劑盒

來源:北京云肽生物科技有限公司   2025年01月13日 08:51  

雙縮脲法蛋白質含量測定試劑盒說明書

微量法 100T/96S

 

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定,確保蛋白濃度在 110mg/ml 范圍內。

測定意義:

樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。

測定原理:

強堿性溶液中,雙縮脲與 CuSO4 形成紫色絡合物;紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量。該方法測定范圍為 1~10mg 蛋白質,適用于蛋白質濃度高的樣品,尤其是動物材料。

組成:

產品名稱

DE6002-100T/96S

Storage

試劑一:液體

20ml

4℃

標準品:液體

1ml

4℃

說明書

一份

標準品:液體 1ml×1 瓶,5 mg/ml4℃保存。

自備儀器和用品

離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸餾水。

樣品中可溶性蛋白質提取提取:

1、液體樣品:澄清無色液體樣品可以直接測定。

2、組織樣品:按照組織質量(g):提取液體積(ml)15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml提取液(自備,根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水))

冰浴勻漿,8000g4℃離心 10min,取上清,即待測液。(動物樣品常常需要稀釋

3 、細菌、真菌:按照細胞數量(104 個):提取液體積(ml500~10001 的比例(建議 500 萬細胞加入 1ml 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);然后 8000g

4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。

測定操作:

1.   分光光度計/酶標儀預熱 30 min,調節波長到 540 nm,蒸餾水調零。

2.    空白管:0.5mL EP 管,加入 40μl 蒸餾水,200μl 試劑一,混勻后室溫靜置 15 min,取 200μl 于微量玻璃比色皿/96 孔板,540nm 比色,記為A 空白管。

3.    標準管:0.5mL EP 管,加入 40μl 標準液,200μl 試劑一,混勻后室溫靜置 15 min,取 200μl 于微量玻璃比色皿/96 孔板,540 nm 比色,記為 A 標準管。

4.    測定管:0.5mL EP 管,加入 40μl 待測液,200μl 試劑一,混勻后室溫靜置 15 min,取 200μl 于微量玻璃比色皿/96 孔板,540nm 比色,記為A 測定管。

注意:空白管和標準管只需測定一次。

樣品中蛋白質濃度計算公式:

C 待測(mg/ml= C 標準管×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)

=5×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)

注意事項:

1.  樣品蛋白濃度須在 110mg/ml 范圍內,低于 1mg/ml 不能用此法,高于 10mg/ml 須做相應稀釋。因此測定前用 12 個樣做預實驗,確保蛋白濃度在 110mg/ml 范圍內。

2.  待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的 PBS 提取。該法受硫酸銨、Tris 緩沖液干擾,提取液中應不含這些物質;否則改用BCA 蛋白質含量測定試劑盒。

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