BCA 法蛋白含量測定試劑盒說明書

分光光度法    50 管/48 樣

正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。測定意義：

樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。

測定原理：

堿性條件下，蛋白質中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將 Cu²⁺還原成Cu⁺；2 分子的BCA 與Cu⁺結合，生成紫色絡合物，在 540-595nm 有吸收峰，562nm 處吸收峰zui強。

自備儀器和用品：

臺式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計、移液器、1 ml 玻璃比色皿和蒸餾水

組成：

工作液配制：臨用前請根據擬用工作液體積（樣本數×1 ml），將試劑A 和B 按照 50：1 的比例混合，蓋緊后充分混勻。

樣品中可溶性蛋白質提取：

1、液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。。

2、組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml提取液（自備，根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水）冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即待測液。

3 、細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴ 個）： 細菌、細胞：按照細胞數量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

測定步驟：

1.     分光光度計/酶標儀預熱 30 min，調節波長到 562 nm，蒸餾水調零。

2. 工作液置于 60℃水浴預熱 30 min。

注意：空白管和標準管只需要做一次。計算公式：

Cpr (mg/ml) = C 標準品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）

= 0.5×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）

Cpr (mg/g)= C 標準品×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）÷ W

= 0.5×（A 測定管－A 空白管）÷（A 標準管－A 空白管）÷ W W: 樣本質量，g

注意事項：

BCA 法蛋白含量測定試劑盒，適用于測定蛋白濃度在 20-5000μg/ml 樣品。測定前取 1-2 個樣做預實驗，若A 測定管－A 空白管﹥1.5，需將樣本用提取液稀釋后再測定，以確保測定的準確性。