生物分離分析領域的分析科學家經常面臨多種挑戰，如對復雜樣品中低豐度的蛋白質進行鑒定和定量。由于生物樣品數量有限，基質干擾強烈，為了在有限條件下實現更高靈敏度的分析，分析科學家們通常通過提高質譜儀的靈敏度、使用更細內徑的色譜柱、改造LC系統來改善LC/MS分析表現。常規LC系統改造策略，如進行管路改造或分流，雖然解決了LC系統的管路內徑較大易導致樣品擴散損失的問題，但往往會導致結果的重現性差，儀器性能不穩定，從而影響了分析的準確性和可靠性。為了解決以上難題，沃特世于2014年推出ACQUITY UPLC M-Class液相系統，致力于為分析科學家提供高靈敏、更可靠的實驗結果。

圖1. ACQUITY UPLC M-Class系統。

作為涵蓋納升級至微升級流速范圍的UltraPerformance LC(UPLC)超高效液相色譜系統，ACQUITY UPLC M-Class不僅提供了優異的UPLC分離性能，還兼容不同規格的色譜柱，流速范圍200 nL/min~100 μL/min，可靈活配置HDX技術、2D色譜和紫外檢測器，適用于不同領域的各類應用。作為質譜儀的前端接口，該系統與高分辨質譜聯用，能夠對復雜樣品進行深度分析表征和研究；而與四極桿質譜聯用，則適用于多肽、代謝物的定量分析或其他靶向性分析工作，如生物標記物的驗證等，其出色的靈敏度滿足了日益增長的分析需求，為科學家們解決復雜的分析難題提供了有力支持。

圖2. 采用ACQUITY UPLC M-Class系統的HDX-高分辨質譜儀平臺。

圖3. 左圖顯示了在線胃蛋白酶消化后鈣調蛋白肽段的色譜分離圖。右圖顯示了從10秒到240分鐘標記的肽段（ADIDGDGQVNY）的質譜結果。隨著在D₂O中暴露時間延長，m/z值會隨之增加。

采用ACQUITY UPLC M-Class系統的HDX平臺可充分利用UPLC的分離能力，與高分辨質譜聯用實現對蛋白質構象的細微變化進行定量分析。HDX數據有助于監測蛋白質構象，定位結合位點和構象變化區域，為候選藥物與靶蛋白的結合、生物制藥產品開發、蛋白質間相互作用等研究提供信息。

圖4. ACQUITY UPLC M-Class系統與串聯四極桿聯用。

圖5. ionKey/MS系統iKey HSS T3, 100?, 1.8 µm, 150 µm×100 mm與ACQUITY UPLC 2.1 mm內徑色譜柱結果對比。與ACQUITY UPLC 2.1 mm內徑色譜柱相比，當注入相同體積時，使用ionKey/MS系統能夠使mafei的檢測靈敏度提高9倍。

微流級ACQUITY UPLC M-Class系統與使用ionKey技術的串聯四極桿聯用，有效提高了電噴霧質譜的電離效率，節約了流動相溶劑和樣品的制備成本，相比于常規的分析級LC-MS平臺能夠顯著提高生物制藥相關分析物（如肽、抗體、寡核苷酸）定量的靈敏度。