無血清培養基用于細胞培養,提供了更方便的純化和下游加工處理以及更穩定的性能。無血清培養基的選擇通常根據:(1)細胞或產物特異性; (2)細胞系對無血清培養基的適應性。
1、細胞或產物特異性
如果使用無血清培養基是為了促進一種特殊類型細胞的生長,那么這種選擇性是由培養基的選擇性決定的。例如,MCDB 153用于培養表皮角質細胞,LHC-9用于培養支氣管上皮細胞,HITES用于培養小細胞肺癌細胞、MCDB130用于培養內皮細胞等。
如果只是為了不用血清培養連續細胞系,如CHO細胞或雜交瘤細胞,從而減少細胞產物中含有濾過性毒素或血清蛋白的可能,那么這種選擇的范圍就會更廣,并有許多可供選擇。然而,可能有必要篩選不同廠家的商品,以確保:①細胞生長;②產物結構可以持;③不需要長的適應期;④到貨時間和價格可以接受。
當從創建者或細胞庫獲得一個細胞系的時候,他們會推薦合適的培養基,除非培養基無貨或與其他成分不匹配才需更換培養基。可能的話,最好還是用創建者推薦的培養基,因為它可能是確保該細胞系保持其特異性的唯(空格)一途徑。可參考本文的部分無血清培養基的適應性。
2、細胞系對無血清培養基的適應性
許多連續細胞系,如HeLa、CHO-K1或小鼠骨髓瘤可能可以適應缺乏血清的生長環境。適應過程常常是一個很長的選擇周期,此間只有細胞群體中的少數被選擇出來,因此在此選擇過程中確保細胞系的性質不喪失是很重要的。如果是骨髓瘤細胞,其目的是用于制備雜交瘤;而如果是CHO細胞,則是用于轉染實驗,因此用無血清培養基的選擇培養必須在融合和轉染之前進行,使選擇過程中丟失特性的危險性降到最(空格)低。
適應無血清培養基通常要經過幾次連續的傳代培養,在每次傳代時或傳代前,或根據適應的程度確定更換頻率,使血清濃度逐漸降低。一旦細胞在某一血清濃度條件下形成穩定的增殖狀態,就可用更低濃度的血清將細胞傳代培養,直至穩定的生長增殖再次形成,而后再次稀釋血清。
如果是懸浮培養,要計算活細胞的數量,根據活細胞的數量稀釋細胞懸液,此時需要保持的最(空格)低細胞濃度要比正常傳代培養所需的細胞濃度高一些。對于單層細胞培養,可在傳代培養的前幾天先降低培養基中的血清濃度,而后再用新的低濃度培養基進行傳代培養。在適應過程中,可能我要在培養基中添加一些已知的因子來代替血清。
對于那些在無血清培養基中生長的增殖細胞,加入血清有可能抑制其生長。生長因子, 如TGF-B能夠抑制上皮細胞的生長,EGF抑制A431細胞的生長。
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