在眾多實驗室分析實驗中,其中進行HPLC樣品分析時,一律都采用超純水來進行測量結果的穩定,從而來確保實驗數據的結果,那么HPLC分析實驗中,超純水有哪些作用呢?
超純水在HPLC檢測中的主要角色
①樣品溶解;
②標準樣品制備;
③作為空白試劑;
④清洗器皿。
水質不純對HPLC檢測的影響
離子雜質的危害:影響水的電導率和pH;與溶液中組分反應。改變吸收譜線,影響儀器判讀;一些離子會腐蝕儀器
有機物雜質的危害:干擾儀器分析的背景;微生物滋生的營養物質。
顆粒雜質的危害:阻塞過濾系統;損壞泵系統;吸附電荷影響離子濃度。折射光線影響判讀;提供細菌滋生載體。
微生物雜質的危害:產生菌膜持續釋放污染物;堵塞儀器通道。
氣體雜質的危害:影響水的離子濃度和PH值;直接參與反應。影響水有效體積;影響光學測定結果。
TOC過高的危害:靈敏度降低:移動相中的有機分子干擾樣品峰。分析結果難以分析及重復性降低:出現unknown的peak判斷錯誤因而提高濃度:雜質與分析物一起流出。滯留時間改變(形成復合物)雜質與介質非可逆性的結合導致分析時間過長并且分辨率降低。
HPLC使用者的期望
穩定的基線(容易進行面積積分)。
良好的分辨率(=分離能力)。
易辨認的對稱性波峰。
好的波峰高度/寬度比。
穩定的洗脫時間。
為何在HPLC中要使用超純水?
用水的純度決定實驗的可控性與重復性使用超純水對于HPLC分析結果有以下優點:
低顆粒物質污染:較硬的顆粒會刮傷增壓泵,較軟的顆粒會阻塞進入管柱前的濾膜。顆粒還可能改變樣品的組分。
低離子污染:洗脫緩沖液的穩定性好。避免腐蝕性離子影響高壓輸液泵等配件的使用壽命。
低TOC污染:改善儀器偵測靈敏性,分辨率及重復性,更穩定的滯留時間,色譜基線穩定及保證管柱介質的合理使用壽命。
低微生物污染:避免管柱中出現有機分子的污染,色譜柱堵塞。低氣泡:流量穩定,基線平穩,避免色譜圖上出現噪聲峰,干擾分析。
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