各種動物外周血中性粒細胞分離液試劑盒

規(guī)格：200 mL/kit 

保存：本產品對光敏感，應該室溫

避光儲存，保質期 2 年。無菌開封后，保存于室溫。

試劑盒組成：  試劑A 200mL 試劑C 100mL 細胞洗滌液 200mL 紅細胞裂解液 100mL

操作步驟：  1. 取新鮮抗凝全血，血液體積小于5mL時，在離心管中先加入4mL試劑A，后將2mL試劑C小心疊 加于試劑A之上，形成梯度界面（血液體積大于等于5mL，試劑A與試劑C比例2：1，試劑總量與稀 釋后的樣本量相等。但二者的總體積不能超過離心管的三分之 二，否則會影響分離效果），將血液平鋪到分離液液面上方， 注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液， 然后將血液小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將 形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時間較長，在離 心之前出現(xiàn)紅細胞成團下沉屬正常現(xiàn)象。） 2. 室溫，水平轉子500~1000g，離心20~30min（血液的體積 越大所需的離心力越大，離心時間越長，的分離條件需摸 索，離心轉速不超過1200g）。 3. 離心后，離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細胞層，上層細 胞為單個核細胞層，下層細胞為中性粒細胞層，如圖所示（個 體差異或者是分離條件不同，粒細胞層可分離不明顯）。 4. 用吸管小心吸取試劑C與試劑A之間以及試劑A中的中性 粒細胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細胞洗滌液洗滌 細胞。250g，離心10min（如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞 裂解液）。 5. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心 10min。 6. 重復步驟6 7. 棄上清，細胞重懸備用。

注意事項：  A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免 微生物污染。。 B. 分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是 分離示意圖 血漿層 單個核細胞層 試劑 C 試劑 A 紅細胞層 中性粒細胞層 溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。 C. 血液樣本為新鮮抗凝血（采血2 h以內），為保持淋巴細胞的活性，應避免冷凍和冷藏。 D. 血液樣本不需稀釋，直接進行分離即可。 E. 稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導致血細胞凝集， 大大降低細胞得率及純度。 F. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。 G. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調節(jié)離心轉數(shù)和離心時間，摸 索的分離條件。 H. 如果要進一步對分離的細胞進行培養(yǎng)，那在收集血液和分離過程中，注意無菌操作，避免微生 物污染。 I. 不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提 供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。