成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養箱


化工儀器網>技術中心>儀器文獻>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

經濟高效的免疫熒光實驗和長期樣品存儲的理想載玻片

來源:拓赫機電科技(上海)有限公司   2021年06月18日 17:02  

ibidi提供了一個簡單經濟高效的方案,使用可移除的12孔腔室載玻片進行細胞的培養,固定和染色。培養MCF-7細胞并用formalin溶液固定。細胞核用DAPI和肌動蛋白骨架用DYE-490鬼筆環肽染色。可以使用一抗和二抗染色通過免疫細胞化學探測其他細胞內結構。

30.jpg

德國ibidi 81201載玻片

實驗使用的材料和試劑列于下面。

  • 12孔腔室載玻片,可移除(ibidi,81201)

  • 用于腔室的蓋玻片,可移除,24mm x 60 mm(ibidi,10811)

  • 細胞:MCF-7(CLS,300273)

  • 細胞培養基

  • 細胞培養試劑

  • 聚苯硫醚

  • formalin溶液中性緩沖液,10%(Sigma,HT5011)

  • 染色試劑

o  DAPI(Sigma,D954)

o  DYE-490鬼筆環肽(Dynomics,490-33)

  • 安裝介質:FluoroshieldTm值(Sigma,F6182)

實驗方案:

步驟1:

必須在預實驗中確定細胞系的正確接種濃度。根據您的細胞類型,用2-6x10 4細胞/ ml在2-3天內產生匯合的單層。
1.打開12孔可移除腔室載玻片(ibidi,81201)包裝,在無菌條件下可拆除。
2.像往常一樣用胰蛋白酶消化并計數細胞。細胞濃度為5×104細胞/ ml MCF-7。
3. 將250μl細胞懸浮液加入腔室的每個孔中。避免搖晃,因為這會導致細胞分布不均勻。
4. 用配套的蓋子蓋住。在37°C和5%CO2下培養。細胞至少培養24小時,或直到建立融合的單層

 

步驟2:

固定是染色程序的第一步。目標是將細胞,細胞形成物或組織維持在其當前狀態,并在較長時間內通過化學試劑保存。
1.小心地吸出細胞培養基。
2.用PBS洗兩次。
3.加入250μl的formalin溶液。
4.在室溫下孵育30分鐘。
5.小心吸入formalin溶液。
6.用PBS洗滌三次。

 

步驟3:

應根據感興趣的細胞結構選擇染色試劑。在該方案中使用DAPI和DYE-490鬼筆環肽染色MCF-7細胞的細胞核和肌動蛋白骨架。
1.準備你的染色溶液:· 聚苯硫醚· DYE-490鬼筆環肽· DAPI 1µg/ml
2.小心吸出PBS。
3.移取250μl染色溶液到每個孔中
4.在室溫下避光孵育30分鐘

 

步驟4:

在染色后清洗你的樣本會使背景信號降到很低   
1.小心地吸出染色溶液 
2.加入250μl緩沖液     
3.小心吸入緩沖液   
4.重復步驟2和步驟3一次

 

步驟5:

從一個邊部開始,用手或用鑷子小心地取下硅膠墊圈。該步驟應以緩慢,穩定的進行,以避免損壞細胞層。

33.png

步驟6:

完成染色程序后,必須在用顯微鏡成像之前封固樣品。該步驟還防止樣品脫水。
1.將載玻片側面在干凈的實驗室濕巾上輕敲,從樣品中去除多余的介質。
2.將封固劑涂在樣品上。用24毫米x 60毫米的蓋玻片覆蓋安裝的樣品,小心地將蓋玻片放到安裝介質上,以避免夾住任何氣泡。推薦使用諸如FluoroshieldTm值(Sigma-Aldrich),Vectashield®(Vector Laboratories Inc.)或ProLongAntifade®(ThermoFisher Scientific)的硬化封固劑。
3.安裝封固劑固化。

33.jpg

步驟7:顯微觀察

使用12孔可移除載玻片培養MCF-7細胞,用DAPI和DYE 490鬼筆環肽染色細胞結構。使用硬化封固劑安裝載玻片保存樣品以便長期儲存。
圖1用DYE490鬼筆環肽(左上)染色MCF-7細胞的肌動蛋白骨架,并用DAPI(右上)染色細胞核。下圖顯示了合成圖像,其中細胞核為藍色,肌動蛋白骨骼為綠色。(比例尺:100μm)

免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 欧美一二三区一级片| 色噜噜狠狠亚洲综合在爱| 亚洲人成伊人成综合网久久久| 95国产精品人妻无码久久久| 射精品欧美人妻内射| 国产FREESEXVIDEOS性中国| 国精品午夜福利视频不卡麻豆| 国产色精品VR一区二区| 美国黄色大香蕉| 亚洲精品久久久无码| 日韩欧美国产中文字幕在线| 亚洲日韩欧美综合| 国产一区二三区日韩精品| 国产精品色拉拉免费看| 9精品国产在热久久| 亚洲欧美精品无码大片在线观看| 国产真实乱对白精彩久久老熟妇女| 久久精品欧美日韩精品不卡| 成人av大香蕉| 校草被教官C得合不拢腿视频| 欧美精品久久96人妻无码| 亚洲国产精久久久久久久| 国产精品福利91| 亚洲精品久久无码AV片俺去也| 亚洲精品久久久久久无码AV| 国产精品一区二区高清在线| 国产极品粉嫩福利姬萌白酱| 日本巜侵犯人妻人伦| 中文字幕一区日韩精品欧美| 中国特级黄一级**毛片| 长篇YIN荡乱合集小说免费TXT下载| 国产欧美一区二区日韩| 久久久精品久久| 狠狠狠的在啪线香蕉| 男女后式激烈GIF动态图| 中文字幕av精久久| 精品国产综合久久久久久| 美女扒开胸罩露出奶头的动态图片| 国产GV无码A片在线观看| 日本XXXWWW在线观看| 亚洲av午夜精品人妻|