上海琛藝實業有限公司經過數年的努力發展已迅速成為集產品研發、生產、經營為一體的專業化生物工程公司。公司新引進細胞上千株，其中人的已通過STR鑒定的有幾百株，歡迎各位選購。。。。。。

產品名稱：SW1990-LUC人胰腺腺癌熒光素酶標記細胞 處理方法

特點：細胞代數為4代以內，細胞耐藥倍數8倍以上；

包裝：內層無菌自封袋；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說明書

細胞來源：ATCC、sciencell、ICLC

貨期：1-2周

運輸方式：快遞運輸

售后：收到細胞后12天，如發現細胞有質量問題（如污染，死亡，快遞運輸等原因）時，應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員，我們將盡快為您解決！

注：耐藥細胞培養操作流程和普通細胞培養方法基本一致，只是在培養中會加藥維持篩選壓力

?SW1990-LUC人胰腺腺癌熒光素酶標記細胞 處理方法

?三、細胞生長條件：

一、組成：

組份 數目

細胞 1 T-25瓶

細胞說明書 一份

二、細胞簡介：

生長特性： 貼壁生長

細胞來源： 從ATCC/中科院/協和醫院等地引進

培養條件： 培養基：90%1640培養基 +10%FBS（推薦BI  -04-001-1ACS*胎牛血清）

氣相：空氣95%，二氧化碳5%

溫度：37℃

培養： 一、貼壁細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒，將其平躺置于培養箱中進行2-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養基并置于細胞培養箱中培養，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代；

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進行傳代，第yi次傳代比例為1:2。

3傳代步驟：將0.25%含EDTA胰酶置于37°預熱，倒掉培養瓶中的培養基，往培養瓶中加入1mlPBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預熱好的胰酶，置于37°孵育消化（第yi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為*消化時間，記錄*消化時間，以便于下次消化），消化好后加入1ml*培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養基重懸細胞，進行傳代。

二、懸浮細胞

1.用75%酒精噴灑整個瓶消毒，然后置于無菌操作臺，打開瓶口，輕輕吹打后，將其中的細胞懸液轉移到離心管中，然后1200rpm離心3min，去上清；

2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中，并加入5-6mL新鮮培養基，然后將其置于細胞培養箱中培養，根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液（離心后去舊液，加入新鮮培養基）；

3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時，對其進行傳代，第yi次傳代比例為1:2（離心后平均分成兩瓶培養）。

細胞總數： 1~3*106

傳代周期： 2-3天

傳代比例： 1:2~1:4

換液頻率： 2-3天

凍存液： 90%FBS+10%DMSO

四、注意事項：

1 收到細胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2 瓶中運輸的培養液不能重復使用，請換新鮮培養液培養

3 對于貼壁細胞，若大部分細胞漂浮，置于培養箱隔夜觀察，大部分漂浮細胞重新貼壁，表明細胞活力正常，繼續培養，剩余漂浮的細胞可以去掉；若大部分細胞仍然不貼壁，將漂浮的細胞離心收集，用臺盼藍染色鑒定細胞活力，并與本公司銷售人員及時聯系。

4 建議客戶收到細胞后不同倍鏡各拍幾張細胞的照片，記錄細胞狀態，如細胞狀態出現問題請于72h內與本公司銷售聯系，以便于更好的幫您解決問題，超過時間我段，本公司則默認細胞狀態良好，不免費對后續細胞狀態問題進行售后。

做細胞實驗的同學看過來。

選擇上海琛藝生物細胞有3個理由：

1、細胞狀態好，形態佳，易成活，是市面上比較好養的細胞之一;

2、物流迅速，復蘇好后發貨，次日就能到;

3、使用我司推薦的進口品牌血清進行培養實驗，效果更佳。

專業技術人員萬工收藏的細胞培養小技巧:

1. 買細胞要去靠譜的地方買，比如 ATCC 或者上海琛藝。一般上面會有針對細胞的介紹，這樣培養之前可以了解細胞正常生長的狀態圖、傳代、培養基的類型等。

2. 不管是買的細胞，還是別人惠贈的細胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測是否有支原體污染;迅速擴增凍存，凍存細胞復蘇后第二天*更換一次培養基。

3. 發現細胞有污染迅速處理掉，特別是當你養了很多種細胞時。細菌污染、真菌污染很容易發現，支原體污染的話，細胞會長的慢，可以買個支原體檢測的試劑盒定期檢測一下。

4. 不同細胞生長周期不同。有的生長很快，比如說 MDA-MB-231，傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經足夠了。有的又是特別慢，比如 BT474，傳代是一分二，復蘇起始的時候兩周多才能長滿。這就需要要在培養細胞的過程中多多摸索。

5. 對于嬌弱的細胞，就得細心呵護。胰酶消化不能過久，吹得時候要輕柔，離心時候也要注意轉速和時間。每天都要去看一下細胞，肉眼觀察培養基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況。記住，是每天。

 剛收到細胞時，胎牛血清可以用15%培養兩三天，利于細胞盡快恢復狀態，細胞穩定后
再調回10%即可
   收到細胞后如細胞狀態不佳，或培養中遇到問題，煩請當天盡快聯系，以便處理。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要參考依據，請您務必重視。

1. 為什么培養的細胞要及時傳代？
    答：體外培養的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續。
2.培養液pH下降很快可能原因有哪些？其解決辦法是什么？
    答：通常細胞生長得非常快時，pH值通常下降得很快。此時可以及時傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決。此外，培養瓶蓋擰得太緊、NaHCO3 緩沖系統緩沖能力不夠、培養液中鹽濃度不正確、細菌、酵母或真菌污染等也能導致pH值通常下降得很快。
       (1)按培養液中NaHCO3 濃度增加或減少培養箱內CO2 濃度，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3對應CO2濃度為5％到10％。
       (2)改用不依賴CO2培養液。
       (3)松開瓶蓋1/4 圈。加HEPES 緩沖液至10 到25mM終濃度。
       (4)在CO2 培養環境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks 鹽配制的培養液。
       (5)如果是污染造成的則丟棄培養物或用抗生素除菌。
3.培養液pH對細胞生長的影響？
    答：由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對細胞生長將產生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養用液時，需要注意一點：培新配的培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。
4.購買之細胞冷凍管經解凍后，為何會發生細胞數目太少之情形？
    答：研究人員在冷凍細胞之培養時出現細胞數目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應待細胞生長隔夜后再更換培養基即可。但對于DMSO敏感的細胞，還是復蘇細胞時，用離心去除DMSO比較好。
5.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？
    答：研究人員在細胞培養時出現存活率不佳，原因比較復雜，常見原因可歸納為：培養基使用錯誤或培養基品質不佳；血清使用錯誤或血清的品質不佳；解凍過程錯誤；冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心；懸浮細胞誤認為死細胞；培養溫度使用錯誤；細胞置于–80 ℃太久等。建議嚴格參照ATCC或ECACC的標準操作規程進行細胞復蘇、凍存等工作。
6.支原體污染會對細胞培養有何影響？
    答：支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數、代謝及研究之任一數據。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結果之數據方有意義。
7.冷凍保存細胞之方法？
    答：冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃(30－60 分鐘)→-20℃( 30 分鐘) → -80℃(16－18 小時或隔夜)→ 液氮罐長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80 ℃以下， 再放入液氮中長期儲存。注意：-20℃不可超過1 小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
 
8.懸浮細胞應如何繼代處理？
    答：一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養瓶中，稀釋細胞濃度即可。若培養液太多時可分瓶取出一部份含細胞之培養液至另一新的培養瓶中，加入新鮮培養基稀釋至適當濃度，重復前述步驟即可。
9.欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速？
    答：欲回收動物細胞，其離心速率一般為300×g (約1,000rpm)，5 - 10 分鐘，過高之轉速過長時間都將造成細胞死亡。合適的離心轉速是根據相對離心決定。 RCF=1.119×105×r×(rpm)2，其中 r為離心機轉軸中心與離心套管底部內壁的距離；rpm為離心機每分鐘的轉數；RCF為相對離心力，以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍數來表示表示單位。
10.培養細胞時應使用5%還是10%CO2，或者根本沒有影響？
    答：一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統， 而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3 含量為每公升3.7g時，細胞培養時應使用10% CO2；當培養基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應使用5%CO2培養細胞。
11.細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DMSO？
    答：除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞)，在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養方瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
12.冷凍管應如何解凍？
    答：取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1－2 分鐘內大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺操作細胞，用75％消毒凍存管，用新鮮培養基將細胞轉移至培養瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂