SK-HEP-1-LUC人肝癌熒光素酶標記細胞 培養步驟

溫馨提醒：

1、可將培養瓶內多余的培養基轉移至50ml無菌離心管中，備用；細胞*傳代時，可以將該培養基按照一定比例和客戶自備的培養基混合使用，讓細胞逐漸適應培養條件。

2、確認細胞狀態良好后，應及時將部分細胞凍存，再進行后續的實驗，避免后期實驗失誤可能發生細胞污染或死亡而導致的細胞丟失，影響后續實驗。

3、建議客戶收到細胞后前3天，100X、200X、400X各拍3張細胞照片，記錄細胞狀態，便于后續和技術支持溝通交流。

SK-HEP-1-LUC人肝癌熒光素酶標記細胞 培養常見問題

問題1：培養液pH 值變化太快

SK-Hep-1(人肝癌細胞)說明書細胞結構：

SK-Hep-1(人肝癌細胞)說明書可能原因

（1）CO2 張力不對

（2）培養瓶蓋擰得太緊

（3）NaHCO3 緩沖系統緩沖力不足

（4）培養液中鹽濃度不正確

（5）細菌、酵母或真菌污染

建議解決方法

（1）按培養液中NaHCO3 濃度增加或減少培養箱內CO2 濃度，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3 對應CO2 濃度為5％ 到10％。

（2）松開瓶蓋1/4 圈。

（3）改用不依賴CO2 培養液。加HEPES 緩沖液至10 到25mM 終濃度。

（4）5637(人膀胱癌細胞)在CO2 培養環境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks 鹽配制的培養液。

（5）丟棄培養物，或用抗生素除菌。

問題2：培養液出現沉淀，但pH值不變

SK-Hep-1(人肝癌細胞)說明書可能原因

（1）洗滌劑清洗后殘留有磷酸鹽，將培養基成分沉淀下來

（2）冰凍保存培養液

建議解決方法

（1）用去離子水反復沖洗玻璃器皿，然后滅菌。

（2）將培養液加熱到37℃，搖動使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養液。

問題3：培養液出現沉淀， 同時pH 發生變化

可能原因

細菌或真菌污染

建議解決方法

丟棄培養物，或用抗生素除菌。

SK-Hep-1(人肝癌細胞)說明書如何處理？

1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續服務依據）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態（所拍照片將作為后續服務依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。