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三鹿奶粉致命成分——三聚氰胺檢測方法匯總

閱讀:6222        發布時間:2008-9-20

三鹿奶粉事件沸沸揚揚,各地致病患兒的致命成分——三聚氰胺檢測方法匯總


發布日期:

檢測方法

GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺

Spectra-Quad實現三聚氰胺含量在線檢測

超液相色譜_電噴霧串聯質譜法測定飼料中殘留的三聚氰胺

反相液相色譜法測定飼料中三聚氰胺的含量

液相色譜-二極管陣列法測定高蛋白食品中的三聚氰胺

液相色譜法(HPLC)測定飼料中三聚氰胺的含量

液相色譜-四極桿質譜聯用測定飼料中三聚氰胺含量

固相萃取與液相色譜聯用測定寵物食品中三聚氰胺

液相色譜串聯質譜法(LC-MSMS)分析寵物食品中三聚氰胺

液相色譜-串聯質譜法測定飼料中三聚氰胺殘留

GC-MS法測定動物食品中的三聚氰胺

附:三聚氰胺檢測方法示例

儀器與條件

液相色譜儀;二極管陣列檢測器(DAD),檢測波長240nm,柱溫:40

(1)AgelaVenusilTMASBC18(4.6×250mm);緩沖液:10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相:緩沖溶液:乙腈=85:15;流速:1.0mL/min

(2)AgelaVenusilTMASBC8(4.6×250mm);流動相:緩沖液:乙腈=8515;緩沖液:10mM檸檬酸,10mM辛烷磺酸鈉,調pH3.0;流速:1.0mL/min;

離子交換固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX

試劑與樣品

寵物飼料樣品(農業部飼料供應中心提供);甲醇、乙腈為北京艾杰爾科技有限公司提供;氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購于北京化學試劑公司;三聚氰胺標準品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉(Sigma公司);甲醇為色譜純,其他均為化學純。

實驗方法

1、樣品前處理方法

(1)標準樣品配制:

50mg三聚氰胺標準品,以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標準溶液,使用時,以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。

(2)提取:

稱取飼料樣品5g,加入50ml0.1%三氯乙酸提取液,充分混勻,加入2mL2%乙酸鉛溶液,超聲20min

然后取部分溶液轉移至10mL離心管中,8000rpm/min離心10min,取上清液3mL過混合型陽離子交換小柱(PCX)

(3)凈化(PCX小柱,60mg/3mL)

a)活化及平衡:3mL甲醇,3mL

b)上樣:加入提取液3mL

c)淋洗:3mL;3mL甲醇;棄去淋洗液并將小柱抽干。

d)洗脫:5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配制:5mL氨水+95mL甲醇)

e)濃縮:50,氮氣吹干,20%甲醇/水定容至2mLHPLC分析或衍生后GC/MS分析。

2、三聚氰胺被立案

2.1三聚氰胺HPLC-UV檢測方法

三聚氰胺是強極性化合物,在傳統的反相C18柱上保留很差,需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離,按照美國食品藥品監督管理局(FDA)的三聚氰胺檢測方法和中國農業部公布的三聚氰胺檢測方法,采用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱,可以得到良好的分離效果:

(a)色譜柱:VenusilASBC84.6×250mm;標準:FDA方法;流動相:緩沖液:乙腈=8515;緩沖液:10mM檸檬酸,10mM辛烷磺酸鈉,調pH3.0;流速:1.0mL/min;柱溫:40oC;波長:240nm

(b)色譜柱:VenusilASB-C184.6×250mm;標準:中國農業部頒標準方法;緩沖液:10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相:緩沖溶液:乙腈=85:15;流速:1.0mL/min;柱溫:40;波長:240nm

空白加水平(mg/L)回收率0.01116%0.1108%0.592%296%

2.2三聚氰胺LC-MS檢測方法

由于FDA公布的HPLC-UV方法中,流動相添加了離子對試劑,因此限制了液質聯用方法的使用;但不用離子對試劑色譜方法,三聚氰胺在傳統的C18柱上保留很差,不能得到較好的分離定量〔3〕。

基于此問題,艾杰爾科技公司自主開發了新的方法,采用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱,不用離子對試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動相不含離子對試劑,可以用于質譜檢測。

FDA20074月公布的《UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation(HPLC-UV)》相比較,該方法大大降低了zui低檢測限(MSD0.5ppm;UV2ppm),提高了檢測靈敏度。

以該方法分別在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到很好的譜圖。

緩沖液:10mMNH4AC;流動相:Buffer:ACN=955;流速:1.0mL/min;進樣量:樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL,用ACN稀釋成0.1mg/mL,進10uL;柱溫:40;波長:240nm

結果與討論

1、陽離子交換柱(PCX)

三聚氰胺呈弱堿性(弱陽離子化合物),凈化過程一般應選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱(PCX)通過將磺酸基團(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附劑上,具有陽離子交換和反相吸附兩種機理,并具有以下優點:

a)可通過兩種不同溶液的洗滌(/一定pH值的緩沖溶液和有機溶劑),使樣品更干凈,提高檢測的靈敏度。

b)批次重復性好。

c)回收率高,重現性好,即使小柱跑干也可以得到較高回收率。

2LC-MS方法優點:

(1)檢測過程簡便:無須添加離子對試劑,三聚氰胺就可得到良好的保留與分離,避免了配制離子對流動相的復雜過程。

(2)提高了檢測的靈敏度:無離子對試劑,可以用于質譜檢測器,大大降低了zui低檢測限(MSD0.5ppm;UV2ppm)

(3)降低了檢測成本:不用離子對試劑,就不再需要買價格較貴的離子對試劑了,從而降低了檢測成本。

(4)延長了色譜柱的使用壽命:避免了使用離子對試劑減少色譜柱壽命的影響。

(5)該方法所使用的色譜柱具有通用性:無論是用FDA方法、中國農業部部頒標準方法和本公司開發的LC-MS方法,使用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱均能得到一個很好的檢測結果,從而給客戶提供了多種選擇空間。

國家食品質量監督檢測中心有關人士說,在現有的國家標準奶粉檢測中,主要進行蛋白質、脂肪、細菌等檢測。三聚氰胺屬于化工原料,是不允許添加到食品中的,所以現有標準不會包含相應內容。也就是說,三聚氰胺不屬于常規檢測項目,正常情況下,很少有人會想到去檢測它。(轉自儀器信息網)

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