前言氯霉素曾廣泛用于治療各種敏感菌感染，后因對造血系統有嚴重不良反應，故對其臨床應用現已做出嚴格控制。氯霉素可用于傷寒、副傷寒和立克次體病等及敏感菌所致的嚴重感染。氯霉素在腦脊液中濃度較高，也常用于治療其他藥物療效較差的腦膜炎患者。由于氯霉素可引起嚴重的毒副作用，所以建立一種高效、快速的定量流程及檢測方法尤為重要。本文使用SPE1000全自動固相萃取系統對牛肉中的氯霉素進行固相萃取富集，用高效液相色譜質譜儀進行檢測。
本文參考“農業部781號公告-2-2006 動物源食品中氯霉素殘留量的測定 液相色譜—串聯質譜法”采用SPE1000全自動固相萃取系統，測定氯霉素的回收效果，實驗證明，氯霉素回收率在90.2%~99.5%之間，重現性RSD為3.5%，回收率和重現性良好，說明SPE1000全自動固相萃取系統可靠、穩定，適用于動物源食品中的氯霉素樣品前處理。
關鍵詞：氯霉素，SPE1000全自動固相萃取系統，液相色譜串聯質譜，
SPE1000全自動固相萃取系統（萊伯泰科公司）；
SCIEX 4500 液相色譜串聯質譜（SCIEX）；
氯霉素，100 mg/L，壇墨質檢；
氯霉素D5，100 mg/L，壇墨質檢；
氯化鈉（分析純）；
正己烷（色譜純）；
乙酸乙酯（色譜純）；
乙腈（色譜純）；
C18固相萃取柱，（1000 mg/6 mL萊伯泰科）；
實驗用水：超純水。
取1 mL氯霉素標品于10 mL容量瓶中，甲醇定容，配置成濃度為10 μg/mL的標準儲備液。
取100 μL 的氯霉素標準儲備液，用甲醇定容到10 mL，配制成0.1 μg/mL標準工作液。
取1 mL氯霉素D5標品于10 mL容量瓶中，甲醇定容，配置成濃度為10 μg/mL的標準儲備液。
取100 μL 的氯霉素D5標準儲備液，用甲醇定容到10 mL，配制成0.1 μg/mL標準工作液。
取均質后的樣品5g置于50mL離心管中，加入內標200μL，氯霉素標液200μL,加入乙腈5mL，4%氯化鈉5mL，渦旋2min，4000rad/min離心10min，取上清液至另一個50mL離心管中，重復提取一次，合并提取液。提取液中加入正己烷5mL，渦旋2min，2000rad/min離心10min，棄去上層清液，重復一次，加入水飽和乙酸乙酯5mL，渦旋1min，2000rad/min離心10min，將上層液轉移到15mL離心管中，重復提取一次，合并提取液氮吹至干，用水：乙腈（95:5）5mL溶解，備用。
同時做樣品空白，加入內標200μL，剩下同樣品處理 。
按照圖1所示的方法進行SPE1000方法編輯，并加載方法到相應通道，進行樣品的固相萃取。收集洗脫液到收集瓶中，氮吹濃縮至干，用1 mL流動相定容。
圖1 氯霉素的SPE富集方法
液相條件：
色譜柱：C18，5 μm，4.6 mm*100mm；
流 速：0.2 mL/min ；
進樣量：5 μL；
流動相：乙腈：水=40:60;
MS條件：
氣簾氣~40 CAD~9 TEM~150 GS1~40 噴霧電壓-4500V
表1 氯霉素母離子/子離子(定量例子152.0)
名稱 | 母離子/子離子 | CE | DP | CXP |
氯霉素 | 321.0/152.0 | -23 | -70 | -8 |
321.0/256.7 | -16 | -70 | -8 | |
氯霉素D5 | 326.1/156.9 | -23 | -70 | -30 |
圖2為取200 μL的氯霉素標準工作液和200μL氯霉素內標工作液，用流動相定容到1.0 mL檢測，氯霉素標品出峰色譜圖，出峰時間為 1.50min。
圖2 氯霉素標品出峰色譜圖
圖3氯霉素加標樣品出峰色譜圖，出峰時間為1.50min，圖4為空白樣品色譜圖。
圖3 氯霉素加標樣品出峰色譜圖
圖4 空白樣品色譜圖
液質測定牛肉中氯霉素回收率計算結果如下表，萃取富集后的回收率在之間90.2%~99.5%，重現性RSD為3.5%。
表2 牛肉中氯霉素的加標回收率（加標量4 ug/kg）
名稱 | 回收率（%） | 平均值 (%) | RSD （%） | |||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |||
氯霉素 | 99.5 | 96.0 | 98.5 | 95.3 | 90.2 | 94.3 | 95.6 | 3.5 |
SPE1000全自動固相萃取系統凈化的樣品，其回收率在90.2%~99.5%,重現性為3.5%，準確度與平行性良好且自動化效率高，可應用于此類樣品的前處理方法中。
農業部781號公告-2-2006 動物源食品中氯霉素殘留量的測定 液相色譜—串聯質譜法
12
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務