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文獻(xiàn)名：淀粉基納米顆粒的制備及其與納豆激酶的作用機(jī)理研究

作者：黃銀娟（蘭州大學(xué)， 高分子化學(xué)與物理， 2013， 碩士）

導(dǎo)師：柳明珠 

摘要：由于具有來(lái)源廣、生物相容、可生物降解及易被修飾等優(yōu)點(diǎn),淀粉被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、食品添加劑及可生物降解復(fù)合材料等領(lǐng)域。然而若要作為藥物載體,原淀粉大的尺寸和小的比表面積導(dǎo)致較低的載藥量；若作為可注射藥物載體,大的尺寸還會(huì)引起較大的毒副作用,因而其應(yīng)用受到限制。近年來(lái),可生物降解的淀粉納米晶和納米粒的制備及其應(yīng)用越來(lái)越引起廣大研究者的興趣。本論文以可溶性淀粉為原料,采用反相微乳液法制備淀粉納米粒,研究淀粉納米粒的降解性、生物相容性以及與納豆激酶(NK)的作用機(jī)理,并對(duì)負(fù)載NK的陰離子型淀粉納米粒的體外溶栓性能進(jìn)行了初步研究。具體包括以下幾方面的內(nèi)容：(1)分別以N,N-亞甲基雙丙烯酰胺(MBA)和雙丙烯酰胱胺(BACy)為交聯(lián)劑,采用反相微乳液交聯(lián)法,制備了超小型淀粉納米顆粒(Non-NPs)。考察了反應(yīng)條件如淀粉用量、表面活性劑種類及用量和油水比(O/W)對(duì)產(chǎn)物粒徑的影響,得到制備小粒徑Non-NPs的*條件：淀粉用量為0.2g,山梨糖醇酐油酸酯(Span80)用量為1.0g,油水比為7：1,交聯(lián)劑量為40%(占淀粉葡糖單元的摩爾分?jǐn)?shù)),反應(yīng)溫度為55℃,反應(yīng)時(shí)間為4h。通過(guò)傅里葉變換紅外(FTIR)分光光度計(jì)、核磁共振氫譜(1HNMR)及透射電子顯微鏡(TEM)對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行了表征；采用凝膠滲透色譜(GPC)考察了產(chǎn)物的體外降解行為；通過(guò)熒光光譜法研究了Non-NPs與NK的作用機(jī)理。研究發(fā)現(xiàn),Non-NPs對(duì)NK的熒光強(qiáng)度有靜態(tài)猝滅作用,升高溫度使得二者結(jié)合常數(shù)減小；產(chǎn)物無(wú)明顯細(xì)胞毒性；BACy交聯(lián)淀粉顆粒(BACy-NPs)降解速率快于MBA交聯(lián)淀粉粒(MBA-NPs).結(jié)果表明,Non-NPs與NK通過(guò)氫鍵和范德華力相互作用；二硫鍵的引入可提高交聯(lián)粒子的降解性能。(2)以三氯氧磷(POCl3)為交聯(lián)劑,以醚化的可溶性陽(yáng)離子淀粉為原料,采用反相微乳液交聯(lián)法,制備了陽(yáng)離子型淀粉納米顆粒(Cat-NPs)。通過(guò)條件優(yōu)化得到制備超小型Cat-NPs的*條件：淀粉用量為0.5g,Span80用量為0.5g，O/W為10：1,交聯(lián)劑量為30μL,反應(yīng)溫度為30℃,反應(yīng)時(shí)間為4h。通過(guò)FTIR、1HNMR及TEM對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行了表征；采用3,5-二硝基水楊酸比色法(DNS法)考察了Cat-NPs的體外降解行為；通過(guò)熒光光譜法研究了Cat-NPs與NK的作用機(jī)理。研究發(fā)現(xiàn),Cat-NPs對(duì)NK的熒光強(qiáng)度有增強(qiáng)作用,Cat-NPs與NK結(jié)合常數(shù)隨溫度升高而減小；Cat-NPs無(wú)明顯細(xì)胞毒性,且降解速率較快。結(jié)果表明,氫鍵和范德華力是Cat-NPs與NK間的主要作用；Cat-NPs有良好的生物相容性和降解性。(3)以POCl3為交聯(lián)劑,采用反相微乳液交聯(lián)法,制備了陰離子型淀粉納米顆粒(Ani-NPs)。考察了反應(yīng)條件對(duì)產(chǎn)物粒徑的影響,得到制備超小尺寸Ani-NPs的*條件：淀粉用量為0.5g,Span80用量為1.0g,O/W為10：1,交聯(lián)劑量為30μL,反應(yīng)溫度為30℃,反應(yīng)時(shí)間為4h。通過(guò)FTIR、掃描電子顯微鏡(SEM)及TEM對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行了表征；采用DNS法考察了Ani-NPs的體外降解行為；通過(guò)熒光光譜法研究了Ani-NPs與NK的作用機(jī)理；并通過(guò)稱重法考察了負(fù)載NK的Ani-NPs的體外溶栓性能。研究發(fā)現(xiàn),Ani-NPs對(duì)NK的熒光強(qiáng)度有增強(qiáng)作用,Ani-NPs與NK結(jié)合常數(shù)隨溫度升高而減小；Ani-NPs有較好的細(xì)胞相容性和體外降解性能。結(jié)果表明,二者之間以靜電吸引和氫鍵作用為主；Ani-NPs對(duì)NK具有保護(hù)和控制釋放的作用,可作為NK的潛在載體。

 

關(guān)鍵詞：淀粉納米顆粒； 納豆激酶； 熒光光譜法； 作用機(jī)理； 體外溶栓；