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一、實(shí)驗(yàn)原理

NR/R雙向電泳的基本原理是根據(jù)LaemmLi的SDS電泳原理設(shè)計(jì)的，NR指的是非還原相，R指的是還原相。

SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳可將不同相對(duì)分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)按相對(duì)分子質(zhì)量大小分離開(kāi)來(lái)。NR/R雙向?qū)蔷€電泳的向是在非還原條件下的SDS電泳，電泳結(jié)束后將膠條切下，置于含 2-硫基乙醇的樣品處理液中處理，使其-S-S-鍵被還原斷裂，將處理后的膠條置于第二向SDS電泳槽的夾層中凝膠上方，然后進(jìn)行第二向電泳。

電泳結(jié)果中凡是即無(wú)鏈內(nèi)二硫鍵又無(wú)鏈間二硫鍵的蛋白質(zhì)均處于對(duì)角線上，凡含有鏈間二硫鍵的蛋白質(zhì)，因二硫鍵斷裂，使兩條或兩條以上的肽鏈分開(kāi)，相對(duì)分子質(zhì)量變小，遷移率加大，而出現(xiàn)在對(duì)角線的下方，凡含有鏈內(nèi)二硫鍵的蛋白質(zhì)，因二硫鍵斷裂，而使肽鏈松散，遷移率降低，而出現(xiàn)在對(duì)角線的上方。

二、實(shí)驗(yàn)用品

  （一）器材

（1）垂直板型電泳裝置。

（2） 1ml 和100µL微量進(jìn)樣器，10µL微量進(jìn)樣器。

（二）試劑  

（1）向樣品處理用緩沖液：62.5mmol/L Tris.Hcl,2% SDS,10%甘氨酸，PH6.8。

（2）第二向樣品處理用緩沖液：62.5mmol/L Tris.Hcl,2% SDS,5%巰基乙醇，10%甘氨酸，PH6.8。     

（3）電泳緩沖液：同常規(guī)的SDS電泳，二向均相同。

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