近年來，有機酸的使用在制藥和食品領域越來越普遍，在食品中常用的有機酸主要有乳酸，檸檬酸，酒石酸，蘋果酸等，常被作為營養(yǎng)物質(zhì)。在制藥領域，常用的有機酸主要有乙酸、三氟yi酸、甲酸等，常被作為有機合成的原料，因此不管是食品還是制藥領域有機酸的檢測都是有關部門重點關注的課題。
有機酸是一類廣泛存在于自然界的有機物，很多樣品基體中都已測出不同種類不同含量的有機酸。目前常用測定方法有 HPLC 法、 IC 法和衍生化 GC 方法。
目前液相色譜法（HPLC）是有機酸廣泛的檢測方法，其分離模式是與檢測方法多種多樣，可以根據(jù)樣品的構成與性質(zhì)來選擇合適的色譜條件，有機酸在水中很容易發(fā)生電離，產(chǎn)生多峰現(xiàn)象。為了使有機酸盡可能的以分子形式存在，一般使用酸性流動相來抑制有機酸的解離。通常在流動相中加入磷酸鹽緩沖液、冰醋酸、磷酸等，但小分子有機酸由于極性較強，通常在C18色譜柱上保留較弱，分離較差，本實驗使用新型復合模式色譜柱，建立了3種有機酸的液相色譜分析方法，可得到良好的分析結果。
樣品處理：
稱取多肽藥物樣品20mg于10mL具塞比色管中，加水至10mL，超聲提取20min，取適量樣品在10000rpm下高速離心15min，取上清液過0.45μm的濾膜后作為待測溶液。
色譜條件
復合模式色譜柱原理：
Acclaim®Mixed-Mode WAX-1色譜柱基于新型混合模式硅膠填料，具有疏水和弱陰離子交換性能。與傳統(tǒng)的反相固定相不同，新型填料具有帶可電離末端的烷基長鏈，并且具有很大的潛力，可用于分離各種含有混合物的陰離子化合物，包括藥物，食品和飲料，化學品等。
實驗結果：
采用上述儀器分析方法，對3種有機酸進行線性范圍測試，線性相關系數(shù)r2均大于0.999，線性關系良好。3種有機酸線性范圍、線性相關系數(shù)、LOD（S/N>3）及LOQ（S/N>10)結果見表1，化合物線性方程圖見圖1。
標準品及樣品分析:
圖2.3種有機酸標準品譜圖（濃度100μg/mL）
圖3.多肽藥物樣品及3種有機酸標準品對比譜圖
多肽原料藥在合成過程中使用了乙酸、三氟yi酸，需要對乙酸及三氟yi酸的含量進行控制，所以對多肽樣品中乙酸、三氟yi酸殘留量進行測定,在實際樣品測試中，乙酸被檢出，其他物質(zhì)未被檢出，經(jīng)計算乙酸在樣品中濃度為5.6ug/ml,含量為0.28%，符合*。
結論:
本文建立了液相色譜方法結合新型復合模式色譜柱對3種有機酸的檢測方法。由實驗結果可以看出，基于Thermo Fisher UltiMate 3000 液相色譜儀結合Acclaim® Mixed-Mode WAX-1 色譜柱的檢測方法具有優(yōu)異的靈敏度、穩(wěn)定性和線性范圍，可用于有機酸在制藥和食品領域的常規(guī)分析檢測。
更多產(chǎn)品信息請點擊：液相色譜法（HPLC）
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