影響C18液相色譜柱性能的因素有很多，例如，硅膠純度、色譜柱尺寸、顆粒形狀、粒徑、表面積、孔徑，化學性質包括鍵合類型、碳覆蓋率、封端，在選擇之前，先多了解自己的樣品和雜質，他們的類型結構、極性、酸堿性、分子量大小等等。

 

　　下面要為大家介紹的是C18液相色譜柱的四大填裝方法：

 

　　1、壓勻漿法裝填

 

　　將填料懸浮在適宜的勻漿液中制成勻漿，在其尚未沉降之前，很快以高壓泵將其以很高的流速壓進柱中，便可制備出填充均勻的柱子。這是常見的分析和制備色譜柱的裝填方法。

 

　　2、密度法裝填

 

　　在HPLC發展的早期，常采用“等密度法”來填裝柱。多孔硅膠的骨架密度較高。不同牌號的硅膠因制法不同而有差異，但多在2.2g/cm3以上。因此，需以高密度溶劑配制密度與硅膠骨架密度相近的混合液。常使用的高密度溶劑為碘代和溴代烷類，再與適當比例的其他溶劑相配，配制出具有密度適宜的液體，使填料能呈“失重”狀態懸浮于勻漿液中，以從容地用高壓泵將其壓入空色譜柱中，制出填裝均勻的色譜柱。

 

　　3、法裝填

 

　　對于粒徑較大的填料，可以用干法裝填，其基本方法與填裝氣相色譜柱類似。但需注意的一點是，在干法填裝制備液相色譜柱時，不要過分劇烈地振動和敲打。振動和敲打會使填料因自身粒徑的不均勻性而產生柱子整體上的不均一性，即較大的填料粒子靠近柱壁，而較細粒徑者則傾向集中于柱中心。這種柱內顆粒分布的不均勻性，會導致柱效的降低。比較好的方法是采用小量多次的方法向柱內加入填料，例如每次加入相當于3-5mm柱床的填料，裝一點即在實驗臺或桌面上垂直地輕輕磕幾十下，續加一些填料后，重復上述操作，直至填裝完成。

 

　　4、粘度法裝填

 

　　高粘度法，即使用黏度較高的勻漿液體系以阻止顆粒的沉降?？梢圆捎靡叶肌⒕垡叶?、甘油以及石蠟油等高黏度液體調配勻漿液。但是，高黏度導致流體阻力加大，必將延長裝柱時間且需使用更高的裝柱壓力，在實用上很不方便。因此，高黏度法已很少被采用。