22
可編程熒光檢測器的工作原理和主要特點
可編程熒光檢測器是高壓液相色譜儀常用的一種檢測器。靈敏度在目前常用的HPLC檢測器中最高，在HPLC中應用較多。它用于能激發(fā)熒光的化合物，*靈敏度和良好選擇性是它最大的優(yōu)點，因而在某些領(lǐng)域如藥物和生化分析中起著不可替代的作用。
可編程熒光檢測器的工作原理：
熒光檢測器的工作原理是：用紫外光照射某些化合物時它們可受激發(fā)而發(fā)出熒光，測定發(fā)出的熒光能量即可定量。
很多與生命科學有關(guān)的物質(zhì)，如氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及某些代謝藥物都可以用熒光法檢測。熒光檢測器在生物樣品痕量分析中很有用，尤其在用熒光衍生劑后，可以檢測很微量的氨基酸和肽。
可編程熒光檢測器的特點：
1、靈敏度*
熒光檢測器的靈敏度比紫外-可見光檢測器的靈敏度約高兩個數(shù)量級，最小檢測量可達10^(-13g)。這是因為在紫外吸收檢測法中，被檢測的信號A=lg(Io/I)，即當樣品濃度很低時，檢測器所檢測的是兩個較大信號Io及I的微小差別；而在熒光檢測法中，被檢測的是疊加在很小背景上的熒光強度。熒光檢測器是靈敏的液相色譜檢測器，特別適合于痕量分析。愈是常用的衡量檢測器靈敏度的基準物質(zhì)。另外，熒光檢測器的靈敏度還可以用水的拉曼譜帶的信噪比來衡量。
2、良好的選擇性
產(chǎn)生熒光的一個必要條件是該物質(zhì)的分子具有能吸收激發(fā)光能量的吸收帶，即物質(zhì)分子具有一定的吸收結(jié)構(gòu)；另外的條件是吸收了激發(fā)光能量之后的分子具有高的熒光效率。相對較少的分子具有大的足夠檢測的量子效率是熒光檢測器高選擇性的主要原因。在很多情況下，熒光檢測器的高選擇性能夠避免不發(fā)熒光的成分的干擾，成為熒光檢測的*優(yōu)點。圖4-5-12，中雖然紫外#可見光檢測器在265nm可以檢測牛奶中的維生素B2，但卻取激發(fā)波長265nm，發(fā)射波長520nm做熒光檢測。因為基體成分在此條件下不存在干擾熒光，具有更準確的檢測結(jié)果。
3、線性范圍較寬
線性范圍約！$*6！$+，雖然比紫外吸收檢測器窄，但對大多數(shù)痕量分析，該線性范圍已足夠?qū)?。在分析物質(zhì)濃度較大時，發(fā)射強度由于內(nèi)濾效應可能隨濃度增加而降低。
4、受外界條件的影響較小
5、只要選作流動相的溶劑不會發(fā)射熒光，熒光檢測器就能適用于梯度洗脫。
其中，熒光檢測器的*靈敏度和良好選擇性是它最大的優(yōu)點，因而在某些領(lǐng)域如藥物和生化分析中起著不可替代的作用。