基線噪音是做液相的同學(xué)經(jīng)常感到頭疼的問題,尤其是在做痕量分析的時(shí)候。今天，我們來分析下噪音的來源，以及如何減小和消除噪音。

一、 多種流動(dòng)相的在線混合
流動(dòng)相在線混合是為了簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟，流動(dòng)相混合的不充分是基線噪音的一個(gè)重要來源。
流動(dòng)相混合方式主要兩種：
1.低壓混合：采取時(shí)間脈沖的方式，利用比例閥，將不同流動(dòng)相按一定比例混合。
2.高壓混合：利用多個(gè)泵頭，控制每個(gè)泵的流量，來將流動(dòng)相按一定比例混合。
    從流動(dòng)相開始混合在一起，到流動(dòng)相到達(dá)色譜柱頭，這一段體積叫做延遲體積(Delay Volume)?；旌掀黧w積越大，混合越好，但是相應(yīng)延遲體積就越大，會(huì)造成梯度的延遲。換句話說，就是流動(dòng)相的變化，需要一定時(shí)間后，才能真正到達(dá)色譜柱，對(duì)分離產(chǎn)生影響。這個(gè)現(xiàn)象在使用UPLC或者UHPLC的時(shí)候，會(huì)有比較明顯的作用。

那如何減小因?yàn)榛旌隙斐傻幕€噪音呢？
1.對(duì)于等度的方法：非常簡(jiǎn)單，預(yù)混流動(dòng)相就可以了。
2.對(duì)于梯度的方法：部分預(yù)混流動(dòng)相也會(huì)幫助更好的混合，怎么做呢？看下面的例子。
    方法要求乙腈/水比例從10%走到85%。那可以將流動(dòng)相A配成10%的乙腈，流動(dòng)相B配成85%的乙腈，然后A/B梯度從0%走到100%。這就是部分預(yù)混。
3.增大混合器的體積：一般混合器的體積從幾百ul到幾ml都有，在允許的延遲時(shí)間下，更換一個(gè)體積更大的混合器，能夠有效提高混合的效率。

二、液相硬件問題造成的基線噪音
如果液相系統(tǒng)某些地方的工作不正常，也可能造成基線的噪音。
1.系統(tǒng)有漏：特別是肉眼無法發(fā)現(xiàn)的微漏或者泵的內(nèi)漏，會(huì)造成流速的變化和混合比例的變化，從而導(dǎo)致基線噪音。
    檢查的方法就是對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行壓力測(cè)試：將系統(tǒng)從某個(gè)地方用死堵堵上，如泵出口，或者自動(dòng)進(jìn)樣器出口，將壓力升高到350bar后停泵，監(jiān)測(cè)壓力下降的情況。一般的標(biāo)準(zhǔn)是2-3bar/min的下降是正常水平?；蛘?5%/10min的下降。
2.梯度比例問題：可以對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行一個(gè)梯度測(cè)試，來檢查梯度混合是否準(zhǔn)確和一致。
梯度測(cè)試
a.將A配成0.1%的丙酮，B是水。
b.在265nm的波長(zhǎng)下，將A的比例從10%，20%，30%這樣一個(gè)一個(gè)的升高，每個(gè)比例走3min。
c.可以根據(jù)計(jì)算，看每個(gè)基線臺(tái)階上升是否準(zhǔn)確。
d.也可以從0-100%走一個(gè)連續(xù)的梯度，看基線上升的平滑性和線性。

三、流動(dòng)相脫氣不好造成的基線噪音
    對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣，不僅僅是為了防止系統(tǒng)里面氣泡的產(chǎn)生。流動(dòng)相脫氣越好，基線就會(huì)越好。
    如今常用的脫氣方式是在線脫氣機(jī)，但是有的時(shí)候脫氣并不*。所以當(dāng)有基線噪音問題時(shí)，可以考慮采取多種脫氣方式。
 
    前面三點(diǎn)講的都是內(nèi)在原因造成的基線噪音或者波動(dòng)。如果你前面的原因都找過了，問題還沒有解決，就得考慮一下是不是流動(dòng)相里面有雜質(zhì)或是電路噪音，我們下一節(jié)繼續(xù)講解。