在細胞生物學研究中,細胞增殖和毒性檢測是評估細胞狀態、藥物效果以及生物材料生物相容性的關鍵環節。SuperKine™ 超敏型細胞增殖檢測試劑(CCK-8)以其優勢,為科研人員提供了一種高效、靈敏且操作簡便的檢測方案。
CCK-8 檢測試劑的核心成分是高度水溶性的四唑鹽 WST-8。在細胞內脫氫酶的作用下,WST-8 被還原生成橙色的水溶性甲瓚產物。這一反應與細胞代謝活性緊密相關,活細胞數量越多,產生的甲瓚產物也越多,其顏色越深。通過比色測定,可在 450 nm 波長下準確測量吸光度,進而定量分析細胞增殖情況或評估細胞毒性。
與傳統四唑鹽(如 MTT、XTT、MTS 或 WST-1)相比,CCK-8 的檢測靈敏度顯著提高,能夠檢測到更少量的細胞增殖變化,這使其在低細胞密度或增殖緩慢的細胞系檢測中表現出色。同時,CCK-8 試劑具有良好的水溶性,避免了 MTT 等試劑在使用過程中可能出現的沉淀問題,確保了檢測結果的準確性和重復性。
根據實驗需求,將細胞懸液接種于合適的培養板中。對于貼壁細胞,使用胰蛋白酶消化并計數后,以適當密度接種;懸浮細胞則直接接種。細胞數量依據實驗目的而定,一般每孔 103 - 10? 個細胞是常見起始密度。
待細胞貼壁或穩定懸浮后,按照試劑盒說明,向每孔加入相應量的 CCK-8 試劑。孵育時間依據細胞種類和實驗目的而定,通常為 1 - 4 小時。孵育過程在常規細胞培養箱(37℃、5% CO?)中進行,無需特殊設備。
孵育結束后,使用酶標儀在 450 nm 波長下測量吸光度,部分酶標儀需扣除 630 nm 處的背景吸光度,以提高檢測準確性。若無酶標儀,也可使用普通分光光度計,但需確保比色皿光程一致且操作規范。
CCK-8 檢測試劑廣泛應用于細胞增殖研究,可用于評估細胞在不同營養條件、生長因子或藥物刺激下的增殖能力。在細胞毒性檢測中,通過檢測藥物處理后細胞的代謝活性變化,CCK-8 可有效評估化合物的潛在毒性。此外,CCK-8 還適用于高通量篩選,在藥物研發中高效篩選大量化合物,快速確定具有期望活性的候選藥物。
高靈敏度:CCK-8 對細胞增殖變化的檢測靈敏度高于傳統方法,能更精準地反映細胞生長狀態,尤其適用于低細胞密度或增殖緩慢的細胞系。
操作簡便:無需特殊設備或復雜操作流程,僅需簡單的細胞培養和比色測定步驟,即可完成檢測。
水溶性佳:避免了 MTT 等試劑的沉淀問題,減少了操作中的誤差,提高了檢測結果的可靠性。
兼容性強:與多種常用的細胞培養基和試劑兼容,不影響細胞正常生理狀態,可在常規細胞培養條件下進行檢測。
孵育時間優化:根據細胞類型和實驗目的優化孵育時間,確保甲瓚產物生成量與細胞數量呈線性關系。建議進行預實驗確定最佳孵育時間。
避免光照:CCK-8 試劑和生成的甲瓚產物對光敏感,操作過程中應盡量避光,以防止光對檢測結果產生影響。
細胞狀態監測:在實驗過程中,定期觀察細胞的生長狀態和形態變化,確保細胞處于良好的生理狀態。若發現細胞出現異常,應及時調整實驗條件。
試劑保存:CCK-8 試劑應嚴格按照試劑盒說明書的要求保存,通常為避光、2 - 8℃保存,避免試劑失效或活性降低。
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