在哺乳動物細胞培養中,選擇合適的培養基對于細胞的生長和功能維持至關重要。DMEM 高糖培養基(含 10% 血清,1% 雙抗)以其全面的營養成分和即用型配方,成為眾多細胞培養場景的理想選擇。
DMEM 高糖培養基經過精心配制,已包含 10% 胎牛血清和 1% 雙抗(青霉素 - 鏈霉素溶液),無需額外添加成分,開瓶即可直接用于細胞培養。這種即用型設計大大簡化了實驗前的準備工作,減少了因配制培養基帶來的誤差和污染風險,特別適合那些對時間敏感的實驗和需要快速啟動培養的場景。
DMEM 培養基本身含有豐富的營養成分,包括各種氨基酸、維生素、礦物質和葡萄糖。與 MEM 相比,DMEM 增加了多種成分的用量,尤其是葡萄糖含量高于 4,500mg/L,為細胞提供了充足的能源供應。10% 胎牛血清的添加進一步豐富了培養基中的生長因子和細胞黏附因子,支持細胞的快速增殖和健康生長。1% 雙抗成分則有效抑制細菌和真菌的生長,降低培養過程中的污染風險。
DMEM 高糖培養基適用于多種哺乳動物細胞的培養,包括但不限于成纖維細胞、神經元細胞、神經膠質細胞、平滑肌細胞等原代細胞,以及常見的細胞系如 HeLa、293、Cos-7 和 PC-12 等。對于生長速度快、粘附性低的細胞系,如雜交瘤的骨髓瘤細胞、克隆細胞、DNA 轉染的轉化細胞等,該培養基能夠提供理想的生長環境,促進細胞的旺盛生長和穩定傳代。
在生物制藥領域,DMEM 高糖培養基被廣泛用于疫苗生產和重組蛋白表達。例如,利用 CHO 細胞生產重組人促紅細胞生成素(EPO)和乙肝疫苗等。其高糖配方為細胞的高密度培養和生產過程提供了充足的能源,有助于提高產物的產量和質量。在基礎研究中,該培養基為細胞的長期培養、基因轉染、藥物篩選等實驗提供了穩定的培養平臺。
DMEM 高糖培養基應保存在 4℃左右的低溫環境中,避免光照直射和溫度波動過大。在使用前,將培養基從冰箱中取出,使其恢復至室溫,以確保細胞在接種時不會因溫度驟變而受到應激。
細胞接種:根據細胞類型和實驗需求,將細胞以適當的密度接種到培養容器中。對于貼壁細胞,可以使用培養瓶、培養皿或培養板;對于懸浮細胞,通常使用搖瓶或懸浮培養袋。
培養條件:將接種后的細胞放入細胞培養箱中,設置溫度為 37℃,濕度保持在 95% 以上,二氧化碳濃度為 5% 左右。這些條件有助于維持培養基的 pH 值穩定,為細胞提供一個適宜的生長環境。
定期換液:根據細胞的生長速度和代謝需求,定期更換培養基,一般每 2 - 3 天更換一次。換液時,吸出舊的培養基,用適量的 PBS 或無菌生理鹽水輕輕沖洗細胞,再加入新鮮的 DMEM 高糖培養基。
觀察與記錄:在細胞培養過程中,定期使用倒置顯微鏡觀察細胞的形態和生長狀態,記錄細胞的生長曲線和分裂情況。注意觀察細胞的貼壁情況、細胞密度和細胞形態是否正常。
當細胞生長達到實驗要求的密度或狀態時,可以進行下一步實驗操作。對于需要長期保存的細胞,可以將細胞凍存于液氮中。凍存時,使用含 10% DMSO 的凍存培養基,將細胞懸浮液分裝到凍存管中,放入程序降溫盒中逐步降溫,最終保存于液氮罐中。
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